一氧化氮促进肺癌侵袭转移的初步研究

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目的:本研究的目的是要阐明iNOS、细胞骨架蛋白CaD、OPN在肺癌组织中的表达和临床数据,并对发生了肺癌转移的临床患者数据间的相互关系进行初步探讨。方法:(1)流式细胞术检测转染iNOS和使用SIN-1后A549细胞内钙离子浓度变化。(2) Western blotting检测转染iNOS和使用SIN-1后Caldesmon在A549细胞中表达变化。(3)免疫荧光检测转染iNOS和使用SIN-1后A549中Caldesmon分布和数量变化。(4)划痕实验检测转染iNOS和使用SIN-1后对A549运动迁移能力影响。(5)免疫组织化学检测iNOS、Caldesmon、OPN在肺癌组织和颅内转移瘤中的表达及分布。(6)流式细胞术检测发生和未发生骨转移非小细胞肺癌患者血清中EPCAM+/OPN+细胞比率。(7) ELISA检测发生和未发生骨转移非小细胞肺癌患者血清中OPN浓度。结果:(1)流式结果显示转染iNOS和使用SIN-1后A549细胞内钙离子浓度明显增高。(2) Western blotting结果示转染iNOS和使用SIN-1后,Caldesmon的表达都有明显上调,其中使用SIN-1后A549中Caldesmon的表达略高于转染iNOS。和使用SIN-1后,原本散在分布在胞浆的iNOS变成在细Caldesmon胞骨架膨大部的高度聚合,并呈现结构,加入抑制F-actin-enriched剂1400w后聚合有减弱分散趋势。(4)划痕实验结果显示转染iNOS和使用SIN-1后,相同时间内A549细胞划痕愈合速度快于对照组。(5)免疫组化结果显示,iNOS、Caldesmon、OPN在肺癌组织和颅内转移瘤中高表达,其中OPN在肿瘤细胞中表达,iNOS主要在靠近肿瘤组织的基质细胞中表达,Caldesmon则在肿瘤组织、脉管组织及基质中表达。(6)流式结果显示发生骨转移肺癌患者血清中EPCAM+/OPN+细胞比率高于未发生骨转移肺癌患者。(7) ELISA结果显示发生骨转移肺癌患者血清中OPN浓度高于未发生骨转移肺癌患者。结论:iNOS、Caldesmon以及OPN的超表达与非小细胞肺癌的远处转移有密切关联,可作为转移肺癌的生物标志物。
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