动脉硬化闭塞症(Arteriosclerosis obliterans,ASO)是常见的周围大、中动脉慢性闭塞性疾病之一,尤其好发生于下肢大、中型动脉,是全身性动脉粥样硬化(Arteriosclerosis, AS)在肢体的局部表现。属于祖国医学的“脉痹”和“脱疽”的范畴。本病发病原因至今尚不清楚,病情复杂,并发症多,截肢率和致死率较高,是周围血管难治性疾病,严重危害人类身体健康和生活质量。温脉通是临床治疗早期ASO的有效方剂,由桂枝、黄芪、当归、川芎等组成,具有温阳益气、活血通脉的作用。临床研究表明该方具有抑制血小板黏附、聚集、抗体外血栓形成,降低纤维蛋白原,改善微循环和动脉壁弹性的作用。动物实验表明该方对家兔实验损伤性ASO有显著疗效,可改善血液流变学指标,修复内皮细胞损伤,降低血浆ET浓度、提高NO浓度,调节TXB2/6-Keto-PGF1α平衡。体外实验证实,温脉通可抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移。现代医学认为,ASO的发生、发展是多种因素相互作用的结果,其中,血管内皮细胞损伤是ASO发病得启动因素,单核细胞与血管壁黏附并穿越血管内皮到动脉内膜是ASO发病的关键步骤。本研究应用多种检测手段和方法从细胞分子水平观察温脉通对血管内皮细胞损伤的保护作用及对单核细胞-内皮细胞黏附的影响,并探讨其作用机制,以阐明该方防治ASO的细胞生物学基础,为该方临床应用提供理论和实验依据,并通过温脉通全方与温经益气拆方和活血通脉拆方的比较,证明其立法组方的科学性、合理性。本研究以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和THP-1细胞分别作为血管内皮细胞和单核细胞,应用血清药理学方法进行研究,采用高脂血清处理细胞作为细胞模型。分为正常对照组(5%正常兔血清)、高脂血清组(5%正常兔血清+2%高脂血清)、温脉通全方大剂量组(5%全方大剂量药物血清+2%高脂血清)、温脉通全方中剂量组(5%全方中剂量药物血清+2%高脂血清)、温脉通全方小剂量组(5%全方小剂量药物血清+2%高脂血清)、温经益气拆方组(5%温经益气拆方药物血清+2%高脂血清)、活血通脉拆方组(5%活血通脉拆方药物血清+2%高脂血清)。实验分两部分:第一部分:温脉通对血管内皮细胞损伤的保护作用研究1.采用高脂血清处理HUVEC造成损伤,通过形态学观察、MTT法检测细胞活性、检测细胞上清液中LDH释放等三方面,观察温脉通对HUVEC损伤的保护作用。结果表明,高脂血清处理组细胞间隙增宽,细胞收缩变圆,细胞边界不清,部分细胞脱落;温脉通全方和拆方组细胞间隙变窄,形态趋于正常,脱落细胞减少。高脂血清组细胞活性显著下降,温脉通全方可使细胞活性升高,并有剂量依赖趋势;温阳益气拆方组、活血通脉拆方组亦可提高细胞活性,但效果逊于全方。高脂血清组细胞释放大量LDH,温脉通全方及拆方组使高脂血