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背景和目的:细胞凋亡的失衡与肿瘤发生发展密切相关，其失衡在不同的肿瘤细胞中有不同的表现。在目前已知的三条凋亡信号传导通路中，凋亡抑制蛋白有着重要作用。因此，凋亡抑制蛋白在恶性肿瘤细胞中的作用是当前的研究热点。XIAP是凋亡抑制蛋白家族中的一员，它可以通过抑制caspase-3,6,7,9的激活，从而阻断细胞凋亡。目前有关XIAP在宫颈癌细胞系(HeLa)中的作用的报道罕见。本实验旨在研究： (1)XIAP在HeLa细胞中的表达及作用， (2)HeLa细胞中由肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的调亡与XIAP的作用关系。以期达到为宫颈癌的治疗提供新靶点。
材料与方法:研究对象为人宫颈癌细胞系(HeLa)。采用：(1)免疫组织化学染色(S-P法)，观察XIAP在：HeLa细胞中的蛋白表达及细胞内定位。(2)通过培养人乳腺癌细胞系MCF-7，获取总RNA，采用RT-PCR技术和基因克隆技术构建pEGFP-XIAP和pDsRed2-XIAP融合基因。(3)通过培养HeLa细胞、细胞转染，荧光显微镜观察XIAP在细胞内的表达。(4)细胞转染、TNF-α干扰(对照组、空白对照组、实验组)、流式细胞术(FCM)等方法，检测HeLa细胞的凋亡情况。
结果:(1)在HeLa细胞中存在XIAP蛋白表达，且阳性表达定位于细胞浆。(2)培养细胞MCF-7，采用RT-PCR技术，获得了人类XIAP的全长cDNA(1494bp)。(3)采用基因克隆技术构建了pEGFP-XIAP和pDsRed2-XIAP融合基因，通过PCR技术、酶切反应，证实其插入的片段与预知的相符。其融合蛋白在HeLa细胞中的定位主要表现为弥漫性地分布在细胞核和细胞浆。观察3天，未发现细胞形态有明显变化。(4)在转染了重组质粒pDsRed2-XIAP的HeLa细胞中，加入TNF-α(50ng/ml)，于24t1后收集细胞，AnnexinV-FITC染色和FCM检测，结果显示部分HeLa细胞发生凋亡，其凋亡率分别为：①未处理的HeLa细胞为3.92％，②对照组(只加肿瘤坏死因子TNF-α)45.28％，③空白对照组(肿瘤坏死因子TNF-α+转染空质粒pDsRed2-N1)45.20％，④实验组(肿瘤坏死因子TNF-α+转染质粒pDsRed2-XIAP)11.01％，转染重组质粒组较同等外加条件下细胞凋亡低(P<0.01)。
结论:(1)HeLa细胞中有XIAP蛋白表达，且其阳性表达定位于细胞浆。(2)成功地构建TpEGFP-XIAP和pDsRed2-XIAP融合表达质粒。其融合蛋白在HeLa细胞中的定位为弥漫分布在细胞核和细胞浆。(3)pDsRed2-XIAP融合蛋白能够抑制由TNF-α诱导HeLa细胞的凋亡；提示XIAP可能是治疗宫颈癌的一个新靶点。(4)XIAP在抑制HeLa细胞凋亡的过程中，可能受到其它抗XIAP抑制凋亡因素的作用。