犊牛腹泻是由致病性大肠杆菌感染犊牛引起的一种常见临床疾病。为了解南京地区犊牛腹泻大肠杆菌的流行情况,本文对南京地区犊牛大肠杆菌腹泻进行了病原流行病学调查,并对110株牛源大肠杆菌中的LEE(ler、eaeA)和HPI(irp2、fyuA)基因片段进行了检测,并选取典型代表菌株进行了ler、eaeA、irp2、fyuA基因片段的核苷酸序列测定,为研究犊牛腹泻大肠杆菌的致病机理,更好地预防和控制犊牛腹泻进行了有益的探索。1犊牛腹泻大肠杆菌的分离与鉴定对南京地区犊牛腹泻进行了病原流行病学调查,通过病原分离和生化鉴定,共分离到110株牛源大肠杆菌,同时对分离的细菌进行了血清型鉴定及药敏试验。在分离的110株牛源大肠杆菌中,共有50株细菌被鉴定出0血清型,0血清型主要有078(11/50)、036(8/50)、015(7/50)、026(5/50)、08(3/50)、02(3/50)、09(2/50)、021(2/50)、035(2/50)、01(2/50)、086(2/50)。对其中57株分离菌株进行了肠杆菌科10种常规抗生素药敏试验,试验结果表明,57株分离菌对复方新诺明、氨苄青霉素全部耐药;对氯霉素、头孢噻吩、庆大霉素、环丙沙星、头孢孟多、复达欣、阿米卡星的耐药百分率分别为为33.33%、10.53%、8.77%、7.01%、5.26%、1.75%、1.75%;对头孢西丁全部高度敏感。2犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测通过PCR方法,对犊牛腹泻大肠杆菌LEE毒力岛ler和eaeA基因、HPI毒力岛irp2和fyuA基因进行检测,并对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了0抗原分析。在分离的110株牛源大肠杆菌中,具有LEE和/或HPI毒力岛33株(30%),具有LEE毒力岛的菌株10株(9.1%),具有HPI毒力岛的菌株28株(25.5%),同时具有LEE和HPI毒力岛的菌株6株(5.5%)。3犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的序列测定及分析将PCR方法扩增出的ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段产物进行胶回收,连接到pMD 18-T Vector上转化DH5α感受态细胞后送TaKaRa公司测序。结果表明犊牛腹泻大肠杆菌ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段的PCR扩增产物分别是196bp、552bp、301bp、953bp。用DNAStar软件对犊牛腹泻大肠杆菌let,eaeA、irp2和fyuA基因片段序列与GenBank中报道的相应参考菌株各基因片段进行核苷酸同源性比较分析,同源性高达88.3%～100%,说明上述4个基因片段具有较高的同源保守性。