奶牛乳腺炎是奶牛养殖过程中常见且多发的疾病,可导致奶品质下降,生产性能降低和淘汰率增加,给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。隐性乳腺炎是奶牛乳腺炎的一种,其临床症状不明显,极易被忽视。传统的乳腺炎病原菌检测方法主要根据形态学特征进行,整个过程需要的时间较长。目前PCR的方法也普遍用于乳腺炎病原菌的检测,但多为针对一种或两种病原菌的检测方法。乳腺炎的致病菌种类较多,为此针对单一病原菌的PCR检测方法的临床应用受到一定限制。而多重PCR（multiplex polymerase chain reaction,MPCR）在给定的样本中检测多种标记基因,具有高效和省时的优点。因此,本研究通过对吉林地区奶牛养殖区进行系统性的流行病学调查,分析奶牛隐性乳腺炎的发病情况,掌握致病菌的分布规律,从而建立一种奶牛隐性乳腺炎MPCR的诊断方法,同时采用中药方剂对奶牛隐性乳腺炎进行治疗试验,以期为奶牛隐性乳腺炎的鉴别诊断及流行病学调查提供技术手段,明确吉林地区奶牛隐性乳腺炎发病的一般规律,科学有效地防控本地区奶牛隐性乳腺炎,以减少该病给奶牛养殖业造成的经济损失。本研究于2019年1月-12月对吉林地区桦甸市等6个区域的奶牛场共5826头奶牛进行了胎次、产奶量、养殖方式、泌乳阶段、挤奶方式及饲养管理水平等方面的调查,分离鉴定了吉林地区奶牛隐性乳腺炎的主要致病菌类型。结果显示:桦甸市发病率最高为60.32%,永吉县发病率最低为35.31%;2胎发病率最低,7胎及以上发病率明显升高;5-10月以及12月奶牛隐性乳腺炎发病率明显升高;年产奶量高于7,000 kg奶牛隐性乳腺炎发病率较高;散养发病率高于规模化养殖;泌乳高峰期、泌乳中期奶牛隐性乳腺炎发病率明显升高;手工挤奶发病率高于机器挤奶;饲养管理水平差的奶牛场,发病率高。吉林地区奶牛隐性乳腺炎主要致病菌为葡萄球菌、大肠杆菌以及无乳链球菌,且混合感染比例高。因此,奶牛乳腺炎的防治应从加强饲养管理、科学免疫、优化种群结构、规范及时诊疗以及合理发挥奶牛生产性能等综合措施入手。为了能够同时检测出奶牛隐性乳腺炎中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌以及三种病原菌的交叉感染,本研究设计了三种不同的特异性引物,通过PCR扩增敏感性试验和特异性试验对PCR扩增反应各项参数进行调整优化,建立多重PCR扩增检测体系。结果表明:退火温度为58℃,引物体积为1μL时,以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌以及无乳链球菌混合基因组为模板进行MPCR,可以同时扩增出三种菌的特异性条带,且每个PCR反应的最低限度为10倍稀释梯度。将本研究建立的MPCR体系应用于吉林省四个地区530例疑似乳腺炎奶样检测,同时与传统的细菌生化检测方法进行对比。结果显示,与传统的生化检测相比,MPCR检测方法检出率较高,达到了85.09%,而生化检测只有62.08%。与未检出病原体的奶牛相比,检出病原体的隐性乳腺炎奶牛的产奶量和干物质摄入量显著降低,乳汁中体细胞数（Somatic cell count,SCC）显著升高。结果表明,本研究建立的MPCR方法可以快速鉴别出奶牛乳腺炎的3种主要病原菌,可用于奶牛隐性乳腺炎的临床检测和鉴别诊断。本研究采用中草药复方（芙蓉叶、金银花、连翘、蒲公英、丝瓜络、通草、浙贝母）对奶牛乳腺炎进行治疗。根据根据临床治疗效果、牛奶SCC以及产奶量等三个指标分析比较了中草药复方与抗生素对吉林省奶牛隐性乳腺炎的治疗效果,发现在治疗7 d后,中草药复方的治愈率和产奶量均显著升高、乳汁中SCC显著降低,与抗生素组相当。说明本研究选择的中草药复方对隐性乳腺炎治疗效果明显,有望在后期推广使用。综上所述,奶牛隐性乳腺炎的发病受地区、胎次、月份、产奶量、养殖方式、泌乳阶段、挤奶方式、牧场管理水平及致病菌的影响较大。本研究建立的用于检测奶牛隐性乳腺炎致病菌的MPCR检测体系检出率高,准确性好,可应用于奶牛隐性乳腺炎的诊断,中草药复方可有效治疗奶牛隐性乳腺炎。