本实验以副干酪乳杆菌HD1.7为研究对象，根据文献和GenBank中已登录的prcK．基因和prcR基因全序列的保守区，设计合成多对引物，经多轮PCR扩增获得副干酪乳杆菌群体效应组氨酸蛋白激酶基因片段prcK-550。利用插入失活的方法，将prcK-550基因连接到pUC18上，构建重组质粒pUC180-prcK-550，然后用ClaI酶消化pUC18-prcK-550，使prcK-550基因内部发生单一位点的断裂，并在其中插入一个1.3kb的tet基因，成功构建基因敲除载体pUC18-prcK-550-tet，利用化学转化法将其导入Ecoli DH5a，经四环素平板验证，具有四环素抗性。 本实验采用可在阳性乳酸菌中复制的pMG36e作为质粒，对影响副干酪乳杆菌电转化的几个主要因素进行了初步研究，建立了较优化的电转条件：在电压1.8kV、细菌生长浓度A600为0.78的条件下，经1％甘氨酸处理受体菌并采用AEB1电转缓冲液能够得到较高的转化率。 本实验旨在利用PCR方法克隆拟群体效应相关基因组氨酸蛋白激酶基因(prcK)，进而构建prcK基因敲除载体，并对HD1.7的电转化条件进行初步研究，为prcK基因缺失突变株及回复突变株的构建和进一步研究prcK基因的功能奠定了基础。