【摘 要】
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目的：研究分析ALAS-2转基因小鼠出现的肌疲劳表型以及肌肉疲劳与肌肉线粒体功能障碍的关系并探讨相关机制。 方法：构建ALAS-2转基因小鼠，通过PCR鼠尾基因组筛选鉴定小鼠基因
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目的：研究分析ALAS-2转基因小鼠出现的肌疲劳表型以及肌肉疲劳与肌肉线粒体功能障碍的关系并探讨相关机制。 方法：构建ALAS-2转基因小鼠，通过PCR鼠尾基因组筛选鉴定小鼠基因型，检测尿液中ALA和PBG水平，并分析其行为改变和血红素合成代谢通路的相关基因变化;腹腔注射ALA和ALAD的抑制剂并检测相关指标;选取正常饲养相同月龄的成年雄性ALAS-2转基因和同笼WT小鼠并监测体重，通过小鼠抓力测定仪检测小鼠抓力变化;采取摘眼球取血方式收集全血，检测血清中LDH，CK-MB的活性;断颈处死小鼠后取股四头肌和腓肠肌称重并进行电镜和组织学检测;采用Real-time PCR检测mtDNA含量和UCP3表达和相关基因变化;腹腔注射1％的Evans blue，24h后处死小鼠，股四头肌和腓肠肌冰冻切片，荧光显微镜检测Evans blue的红色荧光;40％消化肌肉成单根肌纤维，10μmDAPI染细胞核，分析单根纤维直径;利用碧云天ATP检测试剂盒检测ATP含量;电镜观察骨骼肌线粒体结构变化;western blot检测相关蛋白表达变化。 结果：ALAS-2转基因小鼠肝脏、脑干和骨骼肌中的ALAS-1的表达受到抑制;相同月龄的ALAS-2转基因小鼠抓力较WT小鼠明显降低;ALAS-2转基因小鼠股四头肌和腓肠肌纤细并且重量和含量都明显降低;ALAS-2转基因小鼠骨骼肌出现肌肉萎缩，表现为血清中LDH和CK-MB的活性升高，HE染色出现核居中现象，腹腔注射Evans blue后在ALAS-2转基因小鼠骨骼肌中检测到明显红色荧光，ALAS-2转基因小鼠单根肌纤维直径明显减小;ALAS-2转基因小鼠骨骼肌出现线粒体功能障碍，表现为ATP含量和UCP3 mRNA表达下降，mtDNA含量降低，电镜出现明显的线粒体肿胀。 结论：ALAS-2转基因小鼠可能是通过引起骨骼肌线粒体功能障碍途径导致骨骼肌肌肉萎缩，这可能是卟啉病肌疲劳的机制。
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