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第一部分靶向增强、干扰人软骨细胞SEDL基因，基因芯片检测细胞内骨发育相关基因表达变化目的：靶向增强或者干扰人软骨细胞SEDL基因，骨再生PCR芯片检测细胞内骨发育相关基因表达变化，为进一步研究SEDT发病机制提供高通量信息。方法：采用定向克隆及大肠杆菌内同源重组的方法分别构建靶向增强SEDL的腺病毒质粒pAd5-SEDL和靶向干扰SEDL的慢病毒质粒LV-siSEDL，分别导入293T细胞包装成重组腺病毒pAd5-SEDL和重组慢病毒LV-siSEDL，酶切鉴定（课题组前期已完成）。HEK293细胞扩增重组腺病毒，收集病毒液，检测病毒滴度。将重组腺病毒、重组慢病毒以最适感染复数（Multiplicity of infection，MOI）分别感染HC-a，实验分4组：增强组（HC-a/pAd5-SEDL）、增强阴性对照组（HC-a/pAd5空载体）、干扰组(HC-a/LV-siSEDL)、干扰组阴性对照组（HC-a/LV空载体），收集4组细胞mRNA进行骨再生PCR芯片检测。结果：1、收获高滴度重组腺病毒pAd5-SEDL，病毒滴度为2.6×1011pfu/ml。2、重组腺病毒和重组慢病毒成功感染HC-a，重组腺病毒对HC-a的MOI值为50，重组慢病毒对HC-a的MOI值为20。3、基因芯片结果：SEDL基因表达改变导致其上下游基因表达发生变化，其中与软骨生长发育密切相关的基因有：COL2A、CD36、FLT1、GDF10、IGF1等。结论：SEDL基因与骨发育相关，软骨细胞内SEDL基因表达变化引起细胞内与骨发育相关的基因表达改变，如COL2A等。第二部分Sedlin蛋白对人软骨细胞增殖的影响及作用机制初步研究目的:结合基因芯片筛选出来的差异基因，探索Sedlin蛋白对人软骨细胞增殖的影响及作用机制，进一步探索X-连锁迟发型脊柱骨骺发育不良的发病机制。方法:实验分为增强组（感染pAd5-SEDL的HC-a）、干扰组（感染LV-SEDLsi的HC-a）、空白对照组（HC-a）。应用MTT法检测三组HC-a的增殖活性；QPCR检测三组HC-a中SEDL基因和COL2A基因mRNA表达；Western blot检测三组HC-a中sedlin蛋白表达；细胞免疫组化检测三组HC-a Ⅱ型胶原蛋白表达。结果:1、与空白对照组相比，增强组HC-a细胞增殖活性增高，干扰组细胞增殖受到明显抑制（P<0.05）。2、QPCR结果显示增强组HC-a SEDL基因表达量最高，空白对照组其次，干扰组HC-a表达量明显降低（P<0.001）。三组细胞COL2AmRNA表达量中，增强组明显高于空白对照组和干扰组，干扰组表达量最低（P<0.001）。3、三组HC-a中，增强组sedlin蛋白表达最高，其次为空白对照组，干扰组表达量最低（P<0.001）。4、免疫组化结果显示三组HC-a中，增强组Ⅱ型胶原蛋白的表达量最高，空白对照组其次，干扰组HC-a内几乎不表达Ⅱ型胶原蛋白（P<0.001）。结论:SEDL通过调节Ⅱ型胶原蛋白的表达影响人软骨细胞增殖。