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斑马鱼（Danio rerio, Zebrafish）又称蓝条鱼、花条鱼等,原产于南亚,是一种常见的热带观赏鱼。近年来,随着现代生命科技的不断深入研究,斑马鱼作为一种新型的脊椎动物模式生物,被广泛地应用于发育遗传学、环境毒理学及人类疾病模型与新药筛选等生命科学相关领域,但其在细菌质量控制方面与小鼠等法规标准化的实验动物仍存在较大差距。在实验室人工饲养条件下,病原菌是干扰斑马鱼健康状态的重要病原,为了有效的预防与控制细菌性病原对斑马鱼健康状态的干扰,以确保其用于科学实验的质量,如何建立快速准确的病原菌检测方法己成为了实验用斑马鱼研究与应用的重要课题之一。本研究以本实验室（上海实验动物研究中心斑马鱼实验室）自然发病且具有典型病症的成年斑马鱼作为实验研究样本,并以该实验室健康斑马鱼以及选自上海南方模式研究中心、上海万商花鸟市场水族馆的健康成鱼作为实验对照,从病鱼病灶组织及对照组相应组织部位病原菌并进行纯培养后,共获得8种优势菌株,并先后采用了形态观察、生化鉴定及PCR筛选的方法对所分离得到的8种细菌进行了结果分析,得出结论1-8菌分别对应为：假单胞菌属、弧菌属、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、温和气单胞菌、泛菌属及水生布戴约维采菌。进一步针对该8种菌对健康斑马鱼进行了致病性预实验,发现3、4及6号菌表现出了较强的致病性,其感染的斑马鱼出现了腹部红肿、尾部溃烂等较为严重的病理症状,且高浓度受试组均在24h内全部死亡,3种菌均隶属于气单胞菌属,由此可见气单胞菌是引发实验室斑马鱼患病的主要病原菌。为了针对气单胞菌属细菌感染斑马鱼的致病性展开进一步研究,选取本实验室病鱼体内自行分离的4号嗜水气单胞菌作为主要研究对象,并以购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）的编号为CGMCC1.2017的嗜水气单胞菌作为阳性对照菌株,针对嗜水气单胞菌的气溶素基因AHA0438、胞外丝氨酸蛋白酶基因ASP、嗜水气单胞菌保守基因gyrB.16S rDNA及气单胞菌属设计特异性引物并进行了PCR扩增,电泳条带位置均与预期结果相符。挑选保守基因gyrB及16S rDNA的特异性扩增产物进行测序,经由NCBI的BLAST软件对样本测序结果进行同源性分析发现,与GenBank中登录的其它嗜水气单胞菌的同源性在94%以上,利用MEGA5.2软件构建系统发育树,进一步从分子水平上确认了4号菌在气单胞菌属中的分型位置。此外,分别利用4号菌与阳性对照菌株对健康斑马鱼进行人工感染实验,以确定该两种菌株的致病性强弱,并通过制作感染发病斑马鱼的组织切片,分析了感染嗜水气单胞菌斑马鱼的组织病理变化。综上所述,对实验动物实施标准化的细菌质量控制是保证其用于科学研究质量的重要一环,本研究对上海地区三个不同的斑马鱼饲养中心进行了采样分析,以上海实验动物研究中心自然发病的斑马鱼作为主要研究对象,构建了斑马鱼常见病原菌的检测方法,并着重阐述了该实验室从病鱼体内自行分离保藏的嗜水气单胞菌感染斑马鱼的致病性研究,为实验用鱼的细菌性疾病防控提供了科学依据和参考。