第一部分一种高产组织芯片技术的建立背景组织芯片(tissue chip),又称组织微阵列(tissue microarray,TMA)是一种高通量、多样本的分析工具。然而传统组织芯片受原始蜡块厚度的限制,产量有限。因此,我们致力于建立一种高产的组织芯片制作方法。目的建立一种高产的组织芯片技术。材料和方法1)选择复旦大学附属中山医院病理科2001年1月-2012年7月胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)标本150例。2)利用我们建立的组织芯片制作技术分别制作了含70例GSIT的组织芯片蜡块和GIST耐药标本组织芯片蜡块,并进行CD117免疫组织化学染色和c-KIT、PDGFRα基因检测。3)利用我们建立的方法和传统组织芯片制作技术制作一混合组织芯片,连续切片并记录各芯条脱失时的芯条张数。结果1)在70例GIST组织芯片中,组织芯条排列整齐,无移位,无缺失,组织代表性好,蛋白保存完整,基因信息未丢失。2)在20例GIST混合组织芯片中,传统组织芯片技术制作区域产量(100张)；而新方法制作的组织芯片区域产量可达1500张。3)在GIST耐药标本组织芯片中,高产组织芯片技术可以实现再次向组织芯片蜡块中增加样本,二次成型,甚至多次成型。4)在高产组织芯片制作中,我们申请了相关专利8项,己授权5项。结论1)高产组织芯片制作方法步骤简单,摒弃了昂贵的组织芯片点样仪设备和繁琐的接种步骤。2)高产组织芯片蜡块可完好保存蛋白和基因等信息。3)相对于传统组织芯片制作方法,本方法能够获得更大的组织芯片产量。第二部分高产组织芯片技术的应用一、应用高产组织芯片技术研究甲状腺转录因子-1在乳腺癌中的表达及意义目的甲状腺转录因子-1(thyroid transcription factor-1, TTF-1)主要表达于甲状腺癌和肺腺癌,常作为发生在这些部位肿瘤的辅助诊断指标。本研究筛查TTF-1在乳腺癌中的表达状况,讨论其病理诊断及鉴别诊断意义。方法制备含70例乳腺癌标本的组织芯片,用免疫组织化学方法检测TTF-1的表达状况。结果70例乳腺癌组织芯片标本中,2例表达TTF-1,阳性率为2.9%,阳性定位于细胞核,均为弥漫强阳性。其中1例为浸润性导管癌2级,1例为浸润性小叶癌。结论乳腺癌中可出现TTF-1的表达,虽然发生率低,但是在肿瘤中出现TTF-1阳性表达并不能除外乳腺癌的可能,在日常病理工作中尤其是在判断转移性肿瘤原发部位时,需要引起注意。二、应用高产组织芯片技术进行原发性食管神经内分泌癌的免疫组织化学研究目的探索新的食管神经内分泌癌(neuroendocrine carcinoma, NEC)辅助诊断指标。方法用高产组织芯片技术制作食管NEC组织芯片,同时制作食管鳞状细胞癌组织芯片用作对照,然后进行免疫组织化学指标P63、HCK、CHG、CD56、SYN、 TTF-1、SSR2、SSR5、P16、CD117等的检测。结果1)P16均为100%弥漫强阳性表达。2)TTF1-只在神经内分泌癌中表达(60%),而CDl17在SCC伴NED和SCC中可有表达(40%,5.3%),但在阳性率及阳性范围、阳性强度均不及NEC(95%)。3)SSR2在食管NEC、SCC伴NED、SCC三组中的阳性率分别为40%、40%和19.3%,SSR5在食管NEC、SCC伴NED、SCC三组中的阳性率分别为70%、70%、15.8%。结论1) P16均为100%弥漫强阳性表达,无鉴别诊断价值。2) TTF-1、CD117可作为食管SCC及食管NEC的鉴别诊断指标。3) SSR2、SSR5在食管NEC、SCC伴NED、SCC三组中均有一定的阳性表达率,为进一步研究生长抑素在食管癌中的抗肿瘤作用提供了理论依据。第三部分高产组织芯片技术的转化与推广