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目的:胰岛素是人体内的重要的多肽,在治疗Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病方面发挥了重要作用。但作为药物用于糖尿病治疗有其固有的缺点,研究激活胰岛素受体的小分子化合物在一定程度上可以克服胰岛素在生产和使用上存在的问题,不失为开发药物的又一途径。细胞膜色谱(CMC)是一种生物色谱,它将药物效应成分的分离和筛选结合到了一起,可以直接从天然产物中筛选特定的效应成分,而采用高表达受体细胞系建立细胞膜色谱模型更是提高了靶点的特异性和效率,为抗糖尿病药物研究开发提供了新的细胞膜色谱模型。方法:(1)胰岛素与高表达胰岛素受体CHO(IR-CHO)细胞特异性作用研究:用HPLC检测IR-CHO细胞和CHO细胞对低浓度胰岛素的吸附量,以及高浓度的胰岛素液与IR-CHO细胞和CHO细胞作用后洗脱液中胰岛素的含量。(2)高表达胰岛素受体CMC模型的建立和评价:制备IR-CHO细胞膜,将活性细胞膜固定在硅胶载体表面,形成硅胶载体细胞膜固定相(CMSP),并将CMSP装填入色谱柱中,建立CMC模型。通过考察CMSP上Na~+K~+-ATP酶活性性随时间变化规律,从而确定CMC模型的寿命;测定CMSP柱前、柱后其上的蛋白含量,以此考察CMC系统的稳定性;测定胰岛素和对照品在CMC上的保留特性来考察模型的特异性。结果:(1)低浓度的胰岛素与CHO细胞和IR-CHO细胞结合后,HPLC检测到IR-CHO细胞吸附的胰岛素远高于CHO细胞吸附的胰岛素。(2)高浓度的胰岛素与CHO细胞和IR-CHO细胞结合后,用pH3.4的磷酸盐缓冲液进行洗脱,HPLC检测到IR-CHO细胞的洗脱液中有胰岛素,而CHO细胞的洗脱液中未检测到胰岛素。(3)CMC模型具有细胞膜活性和色谱分离双重特性,与硅胶柱具有完全不同的分离特性。(4)CMSP酶活性随放置时间延长其酶活性越低,同时,CMSP放置的温度越低,CMSP酶活性降低越缓慢。(5)胰岛素在所建立的CMC模型上具有保留特性,而对照品不与IR-CHO上的胰岛素受体发生作用,在CMC模型上无任何保留特性。(6)胰岛素在CMC柱上的保留时间变化规律与CMSP酶活性随时间变化规律一致。结论:胰岛素能与IR-CHO细胞发生特异性吸附作用,建立了筛选IR激活剂的高表达IR细胞膜色谱模型,其保留值可作为配体与受体作用的指标,此模型在有效期内稳定,能特异的筛选作用于胰岛素受体的小分子化合物。