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病毒入侵动物机体后,动物机体首先发生炎症反应、干扰素抗病毒应答、细胞凋亡等一系列先天性免疫应答,动物机体最初由这些机制抵抗入侵的病毒。然而,很多病毒可以突破先天免疫屏障,进入动物机体并引发疾病。所以,探究病毒的入侵和致病机制对于病毒的防治具有重要意义。而且,研究病毒与宿主之间的相互作用对于了解病毒的致病机制具有非比寻常的作用。猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)而引起的猪体的一种急性、高度传播性的肠道疾病。本病主要特征是急性肠炎、水样腹泻、呕吐和脱水等,各年龄段的猪只均易感,哺乳仔猪发病率为100%,死亡率高达80%-100%,给我国养猪业带来巨大的损失。近几年,学者们积极致力于猪流行性腹泻病毒的受体以及信号通路等的研究,也有PEDV与宿主细胞互作方面的研究。但,PEDV与宿主细胞的互作研究十分有限。因此,本研究意在探究与PEDV结构蛋白互作的宿主蛋白,搞清它们的互作,以及宿主蛋白对PEDV复制的影响和作用机制。本研究以PEDV结构蛋白为诱饵,利用酵母双杂交技术,从PEDV的宿主细胞猪小肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cells,IEC)或易感细胞Vero E6细胞中钓取与PEDV结构蛋白相互作用的细胞蛋白。首先成功构建并鉴定猪小肠上皮细胞酵母双杂交c DNA文库,文库滴度约为8.4×108 CFU/m L,插入的ds c DNA片段大小为0.5-2.0 kb,平均长度约为1.1 kb。随后构建诱饵质粒并检测其自激活性及毒性,成功构建了10个诱饵质粒,其中,8个无毒性和自激活特性。利用酵母双杂交技术钓取与PEDV结构蛋白互作的Vero E6、IEC细胞蛋白,共成功钓出25种细胞蛋白,其中22种为Vero E6细胞蛋白,3种为IEC细胞蛋白。经BLAST分析后,选取部分蛋白进行验证以及更深入研究。经酵母双杂交系统回转验证和免疫共沉淀试验,均可以证实PEDV N蛋白与NDUFB3(NADH dehydrogenase[ubiquinone]1 beta subcomplex,3)蛋白存在相互作用。