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目的本研究采用分支链DNA技术(b-DNA)和免疫组织化学方法来分别检测HPV阳性病人E6/E7 m RNA和HPV L1蛋白表达,探讨不同级别上皮内病变与HPV E6/E7 m RNA及HPV L1蛋白表达的关系,并评估这两种方法在诊断宫颈上皮内病变中的临床价值,以期寻最佳的宫颈病变检测指标,为临床分流HPV阳性病人,监测宫颈病变进展、复发等提供实验依据。方法1.收取2014年2月至2016年2月在河南省直第三人民医院行宫颈液基薄层细胞学检查(thinprep cytologic test,TCT)的标本,采用第二代杂交捕获(hybrid captureⅡ,HC2)法检测其高危型人乳头瘤状病毒DNA,并追踪其组织病理结果。选取其中HPV阳性且具有组织学诊断结果的患者127例,年龄16-77岁,(37.23±16.39)。其中24例细胞学检测为未见上皮内病变细胞或恶性细胞(Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy,NILM)且组织学诊断正常或慢性炎症者设为对照组,收集其剩余TCT标本和宫颈组织石蜡标本,分别进行HPV E6/E7 m RNA和HPV L1检测。2.处理剩余TCT标本,采用分支链DNA技术(b-DNA)检测标本中HPV E6/E7 m RNA水平。3.采用免疫组织化学技术,检测宫颈组织石蜡标本中人乳头瘤状病毒L1蛋白表达水平。4.使用SPSS 17.0软件来进行数据统计分析。HPV E6/E7 m RNA和HPV L1蛋白表达水平与宫颈病变严重程度间关系采用关联分析;E6/E7 m RNA和HPV L1蛋白阳性率间比较采用Mc Nemar检验,不同病变级别组间比较采用χ2检验;不同检验方法间敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值比较采用χ2检验。两种检测方法间一致性评估采用Kappa统计分析。α=0.05为检验水准。结果1.在不同组织学分组对照组、CIN1、CIN2、CIN3和鳞状细胞癌(Squamous Cells Cancer,SCC)组中HPV E6/E7 m RNA的阳性率分别为37.5%、53.6%、85.2%、94.1%、100.0%。HPV L1蛋白的阳性率分别为16.7%、60.7%、29.6%、11.8%、0%,HPV E6/E7 m RNA和HPV L1蛋白表达水平均与组织学诊断级别间有一定联系(χ2分别为35.801和27.320,均P<0.001),关联系数r分别为0.469和0.421(均P<0.001)。CIN1-(包括对照和CIN1)组HPV E6/E7 m RNA阳性率明显低于CIN2+组(包括CIN2、CIN3和SCC,χ2=32.924,P<0.001),而CIN1-组HPV L1蛋白阳性率高于CIN2+组(χ2=9.494,P<0.05)。2.对应不同细胞学诊断级别NILM、ASCUS、LSIL、ASC-H/LSIL-H、AGC、HSIL和SCC中E6/E7 m RNA阳性率分别为37.5%、63.3%、68.8%、84.6%、100%、96.6%、100.0%;HPV L1蛋白表达的阳性率分别为16.7%、43.3%、68.8%、15.4%、14.3%、6.9%、0%。分析HPV E6/E7 m RNA和HPV L1蛋白的表达趋势,发现二者均与细胞学诊断级别间有一定联系(χ2分别为31.680和30.553,均P<0.001),关联系数分别为(r=0.447和0.440,均P<0.001)。LSIL-组(包括NILM,ASCUS和LSIL)E6/E7 m RNA阳性率明显低于ASC-H+组(包括ASC-H,LSIL-H,AGC,HSIL和SCC,χ2=24.403,P<0.001),而LSIL-组HPV L1蛋白阳性率明显高于ASC-H+组(χ2=15.930,P<0.001)。3.HPV E6/E7 m RNA阳性率(73.2%)明显高于HPV L1蛋白阳性率(26.0%,χ2=42.451,P<0.001),两种检测方法的符合率为64.57%(82/127),因而E6/E7m RNA和HPV L1蛋白表达水平间没有联系(χ2=0.979,P>0.05)。4.以组织学为金标准,E6/E7 m RNA分别与HPV L1蛋白检测及两者联合检测方法间敏感性和阴性预测值比较均无统计学差异(χ2分别为2.988和4.474,均P>0.05);但两者联合检测方法特异性高于E6/E7 m RNA检测方法(χ2=7.278,P<0.016),且其阳性预测值高于HPV L1蛋白方法(χ2=6.518,P<0.016),差异有统计学意义。结论1.随着宫颈病变严重程度的增加,TCT标本中HPV E6/E7 m RNA表达水平有增高趋势,而HPV L1蛋白表达则有下降趋势。2.联合检测TCT标本E6/E7 m RNA与病理切片HPV L1蛋白的表达较两种方法单独检测,增加了特异性与阳性预测值。因而两种方法联合检测有望作为进一步分流HPV阳性病人的方法。