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灵芝多糖是灵芝的主要有效成分,具有抗肿瘤、免疫调节、降血脂、降血糖、抗氧化和抗衰老等作用,现已广泛应用于医药、食品、化妆品及临床治疗等方面。目前国内灵芝多糖的生产以子实体栽培和深层培养技术为主。本课题利用固体发酵技术生产灵芝多糖,与传统子实体栽培相比具有难度低、生产周期短、规模可大可小、同等设备产出量高的优点。而与液体发酵生产菌丝相比,又有投资少、占地少、设备和工艺简单、风险小、产品无异味、次生代谢产物积累时间长和培养料来源广泛等优点。以苯酚硫酸法为灵芝多糖测定方法,研究了从固体发酵灵芝菌丝体中提取水溶性多糖的工艺。通过对浸提过程中的温度、时间、固液比及提取次数的单因素试验和温度、时间、固液比的三因素三水平正交试验,得到灵芝多糖的最佳提取条件为浸提温度85℃,浸提时间50 min,固液比1:70和提取次数为1次。并通过浓度系列梯度的乙醇沉淀,确定灵芝菌丝多糖的最佳醇提浓度为90%。对A、B、麸皮、木薯渣、魔芋粉五种原料进行两两配比实验,以发酵菌丝产灵芝多糖含量为筛选目的,确定出最佳固态发酵物为A与B,理想配比为1:4。在确定最佳固态发酵物的基础上进行不同添加物对产糖的影响研究,分别添加葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉、果胶、木糖、甘露糖、果糖9种糖及KH2PO4、K2HPO4、MgSO4 3种盐类至固体发酵物中,证明了通过添加这些物质对产糖无促进作用。通过响应面法中心组合设计实验(RSM)进一步优化,得到培养基A:B配比为7.6:23.1,同时确定最佳加水量为固水比1:2,接种量10%,产糖时间12d。在此条件下发酵验证,得到灵芝多糖达160 mg/g干菌丝左右,菌丝产量达15.6%。通过Sephadex G-25、乙醇分级沉淀和Sephadex G-200分离纯化灵芝菌丝多糖,得到纯多糖GLPⅠ50,占总多糖含量的81.74%。采用Sephadex G-100凝胶色谱法和薄层层析法进行分子量测定和单糖分析,初步判断GLPⅠ50由葡萄糖和半乳糖组成,分子量约为185 000 Da,分子量分布54 000 Da-301 000 Da左右。采用四氧嘧啶诱导小鼠造成糖尿病模型,初步研究了灵芝多糖GLPⅠ50、灵芝菌丝体和灵芝固体培养物对造型后的糖尿病小鼠及正常小鼠的影响。造型后糖尿病小鼠血糖明显升高(P<0.05),而造型后给予GLPⅠ50、灵芝菌丝体和灵芝固体培养物均可显著控制血糖升高(P<0.05),且在停止给予后仍有一定的控制作用(P<0.05),同时GLPⅠ50对正常小鼠没有毒性。