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目的1.建立宫颈鳞癌HCE1多细胞球体紫杉醇天然耐药模型；2.探讨CD147在宫颈鳞癌HCE1多细胞耐药中的作用；3.用CD147单克隆抗体抑制CD147表达后,观察其对HEE1多细胞球体紫杉醇耐药的逆转效应以及对P糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法1.采用液体重叠法和旋转法对宫颈鳞癌细胞株HCE1进行三维培养,建立HCE1多细胞球体模型,单层细胞培养采用常规贴壁法,通过光镜进行形态学观察；观察CD147单克隆抗体作用于HCE1多细胞球体前后的形态学的变化,以单层细胞作为对照。2.WST-1法检测不同浓度的CD147单克隆抗体干预前后,不同浓度梯度的紫杉醇对HCE1多细胞球体的增殖抑制作用,以单层细胞作为对照,计算半数抑制浓度(IC50)和多细胞耐药指数(MCRI),并绘制浓度-抑制率曲线。3.流式细胞仪检测不同浓度的CD147单克隆抗体干预前后,HCE1单层细胞及多细胞球体细胞凋亡及细胞周期的变化,实验分为对照组、CD147单抗组、紫杉醇组、紫杉醇+CD147单抗组。4.免疫细胞化学方法检测CD147单克隆抗体及紫杉醇作用前后HCE1单层细胞和多细胞球体中CD147及P-gp表达。结果1.显微镜下见HCE1细胞生长状态良好,三维培养24小时可见细胞聚集成团,随培养时间的延长,结构更加紧密,直径逐渐增大。CD147单克隆抗体作用于HCE1多细胞球体后的形态学的变化：单层细胞对照组细胞之间连接紧密,成片生长,加入CD147单克隆抗体后细胞之间连接疏松,贴壁较少；多细胞球体对照组细胞能够形成多细胞球体,球体结构稳定,加入CD147单克隆抗体后则不能形成多细胞球体,或者细胞虽然聚集在一起,但结构松散,易吹散。2.WST-1法检测不同浓度的CD147单克隆抗体干预前后,不同浓度梯度的紫杉醇对HCE1多细胞球体的增殖抑制作用：CD147单克隆抗体干预前：紫杉醇作用于单层细胞和多细胞球体的IC50分别为28.27±1.45μg/mL和64.7±1.67μg/mL,MCRI为2.29,两者比较差异有显著性(P<0.05)；以5、10、20ug/ml的CD147单克隆抗体干预后：三维培养HCE-1细胞在紫杉醇诱导下细胞凋亡率上升,IC50分别为40.31±3.73μg/ml、32.43±1.56μg/ml、30.69±1.01μg/ml,MCRI分别为1.48、1.20、1.18,各组与对照组比较,差异均有显著性(P<0.05)。CD147单克隆抗体的抑制作用在低浓度时有浓度依赖性,5μg/ml组和10μg/ml组相比,差异有统计学意义(P<0.05),高浓度时无明显依赖性,10μg/ml组和20μg/ml组差异无明显统计学意义(P>0.05)；CD147单克隆抗体对单层细胞无明显抑制作用,抑制率不随浓度增加而增加,各组和对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。3.流式细胞仪测定各组细胞周期和凋亡率：HCE1多细胞球体细胞周期阻滞于G1/G0期(73.00%±2.65%),细胞白发性凋亡率较低(2.39%±0.42%),而单层培养HCE-1细胞贴壁生长,细胞增殖活跃,细胞多处于S期(42.20%±0.20%),自发性凋亡率较高(6.02%±0.20%)；紫杉醇作用后,单层细胞和多细胞球体均表现为增殖抑制,抑制率分别为33.97%±1.97%,17.40%±0.53%,两者相比,差异有统计学意义(P<0.05)。紫杉醇作用后细胞G2/M期比例均升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但单层细胞G2/M期细胞比例明显高于多细胞球体(P<0.05)；CD147单克隆抗体作用后,多细胞球体抑制率为13.77%±0.59%,G1/G2期比例升高,S期比例减少,与对照组相比,差异有统计学意义,G2/M期比例变化不大；CD147单克隆抗体+紫杉醇作用后,多细胞球体抑制率为37.67%±1.09%,G1/G0期比例增高,S期减少,G2/M期不变。CD147单克隆抗体对单层细胞无明显抑制作用(P>0.05)。4.免疫细胞化学法检测紫杉醇及CD147单克隆抗体干预前后HCE1单层细胞和多细胞球体中CD147和P-gp的高表达率：三维培养的多细胞球体CD147的高表达率分别为53.33%和73.33%,P-gp的高表达率分别为0和46.67%(P<0.05),两者表达均较单层细胞高(P<0.05)；紫杉醇可引起多细胞球体CD147和P-gp表达升高,紫杉醇作用后,多细胞球体CD147和P-gp表达分别为93.33%和73.33%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而单层细胞无相似效应(P>0.05)。CD147单克隆抗体作用后,各组CD147和P-gp表达均降低,且P-gp表达与CD147有一致性。结论1.成功建立宫颈鳞癌HCE1多细胞球体紫杉醇天然耐药模型；2.CD147的表达与宫颈鳞癌HCE1多细胞球体对紫杉醇的耐药呈正相关,阻断CD147可部分逆转HCE1多细胞球体对紫杉醇的天然耐药；3.CD147介导的HCE1多细胞球体的紫杉醇天然耐药可能与P-gp有关。