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目的：拓扑异构酶Ⅱ在生物体内普遍存在，对细胞的DNA复制、转录，染色体的凝集和分离具有重要的作用，在增殖期细胞尤其是肿瘤细胞中表达增高，因而拓扑异构酶Ⅱ成为抗肿瘤药物的理想靶点。体外化疗药物敏感试验显示拓扑异构酶(Topo)抑制剂替尼泊甙(VM-26)对口腔恶性肿瘤的生长抑制作用显著优于目前常用化疗药物如顺铂、平阳霉素等。本研究目的是探讨替尼泊甙体内、外抑制口腔癌细胞增殖作用效果和作用机制，为该药物临床应用提供实验依据，并为寻求同类新药提供技术资料。 材料与方法：以人舌鳞癌Tca8113细胞系和人腭部小涎腺腺样囊性癌肺高转移ACC-M细胞株为研究对象。使用MTT检测法定量检测不同浓度VM-26及顺铂(Cisplatin，CDDP)对Tca8113细胞和ACC-M细胞的增殖抑制率：首先将Tca8113细胞和ACC-M细胞按一定密度接种于96孔板，在培养液中分别加入0.1μg／ml、0.5μg／ml、1.5μg／ml、5.0μg／ml、15μg／ml、45μg／ml的VM-26和0.1μg／ml、0.3μg／ml、1μg／ml、3μg／ml、9μg／ml的CDDP，继续培养1 d、2 d、3 d、4 d、5 d，然后加入MTT，形成结晶后，以二甲基亚砜(DMSO)充分溶解结晶，酶联酶标检测仪测定其吸光度(Optical Density，OD)。nu／nu BALB／C裸鼠36只，鼠龄5周，SPF级条件饲养，称重后分层随机分为两大组，每组18只。一组每只右侧腋下部的皮下接种Tca8113细胞移植瘤组织块约8mm~3大小；另一组每只手左侧腋下部皮下接种ACC-M细胞移植瘤组织块8mm~3大小。7天后，两组动物分别随机分为三个亚组：对照组、VM-26处理组和CDDP处理组；每组6只。每亚组动物分别腹腔注射生理盐水、VM-26和CDDP，VM-26剂量为10mg／kg／次，CDDP中文摘要剂量为sm叭留次，每3天用药1次，共3次。每3天记录肿瘤大小和动物的一般情况。用药35天后引颈处死动物，称量动物体重和瘤重。 选择Tcas 113细胞为实验对象，进行vM一26作用机理研究。先使用荧光染色法观察VM一26作用下细胞生存情况，在Tcas 113细胞培养液中分别加入0.1林g/ml、0.5林g/ml、1 .5林g/ml、5.0林g加1、15林g/ml、45林g/ml的VM一26药物，继续培养ld、Zd、3d、 4d、sd，然后加入EB/AO荧光染料染色细胞，荧光显微镜观察细胞生存情况，并照相;收集同法处理的Tcas 113细胞、以2%戊二醛磷酸盐固定液等固定、脱水包埋、超薄切片、醛酸铀和柠檬酸铅双染色，透射电镜观察其超微结构下的形态变化，照相记录。收集0.15林g/ml，1.5林g/ml，5.0卜g/ml和15林g/ml浓度vM一26作用48h后的Tcas 1 13细胞，PBS漂洗，预冷的70%PBS乙醇固定，PBS洗，RNase处理后以PI染料避光染色30min;200目尼龙网过滤后，流式细胞仪检测其细胞周期分布。以AlmexinV试剂处理上述VM一26干预的几as 1 13细胞，应用FeM检测细胞的凋亡率。选择0.15林g/ml和5.0林g/ml两个浓度的VM一26作用12h、24h、36h、48h和72h的Tcasll3细胞，同上述方法使用流式细胞仪检测其细胞周期分布和凋亡率。实验重复3次，取平均值，均数间比较采用t检验，p<0.05时有显著性差异。结果:MTT法检测结果表明，VM一26、CDDP对Tcas 113细胞和ACC一M细胞的生长抑制率呈明显的量效关系和时效关系。VM一26(5，o林留ml)和cDDP( 3.0林留ml)作用Tcas 113细胞72h，生长抑制率分别达到92.19%和58.9%。VM一26和CDDP对Tcas 113细胞的半数致死剂量分别为0.35林留ml和1 .1林g/ml。荷Tca8113细胞动物的对照组、vM一26处理组和顺铂处理组的平均肿瘤体积分别为3146.50mm3、3巧.08m砰和1225.43~3;荷ACC一M细胞动物的肿瘤平均体积分别为，对照组473 1 .1 7mm3、vM一26组1 1 84.13mm3和CooP组2688.35mm3。vM一26和CooP对Tcas 113移植瘤生长抑制率分别为75 .24%和55.59%，两药物对ACC一M移植瘤的抑制率分别为72.45%、39.65%。两处理组动物未见严重的不良反应发生。荧光染色可直观地表现出Tcas 113细胞随VM一26浓度的上升和作用时间的延长诱导凋亡程度加强。TEM观察可见大部分细胞核浆比例变小、核质浓缩，核膜皱缩，同时染色质固缩，呈块状或新月形位于核膜下，细胞膜结构完整，呈现典型的细胞凋亡形态。流式细胞仪检测结果表明，5.0林g/ml和15林创ml浓度的VM一26中文摘要处理Tcas 113细胞可产生明显的细胞凋亡，48h后细胞凋亡率均分别可达77.5%和81.2%，细胞由Gl/GO期逐渐聚集于S期，表现为GI/GO期峰逐渐向二倍体和四倍体之间移动并停止在二者中间，同时峰高度变低，基底逐渐增宽，显示此时细胞内DNA含量不均一;0.15林岁ml浓度的VM一26处理12h，Tcas 113细胞的周期分布即可发生变化，表现为细胞逐渐通过S期，最终聚集在GZ/M期而不再发生变化，该期细胞比例从对照组细胞的10.75%上升到药物作用72h时的75.18%，但其凋亡率同5.0林g/ml vM一26组的Tca8113细胞明显为低，即使作用72h，凋亡细胞比率也不超过30%。结论:1、体外条件下VM一26对口腔肿瘤细胞较CDDP具有更高的生长抑制作用。2、动物体内实验显示，VM一26对口腔肿瘤细胞也可产生显著的肿瘤抑制作用。VM一26应用具有较好的安全性，提示VM一26是治疗口腔癌(鳞癌、腺癌)安全、有效的药物。3?