重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR-Fc)在治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎等方面具有显著疗效，并日益显示出其重要作用和广阔的市场前景。随着细胞融合技术及基因工程的发展，大规模动物细胞培养技术已成为生物制药走向产业化的关键技术之一。然而宿主细胞的产物表达水平、生产规模以及培养模式的局限阻碍了该药物在中国市场的推广。本课题以表达rhTNFR-Fc的CHO细胞为研究对象，通过选择营养均衡的培养基，并建立合理的控制策略，从而提高CHO细胞的细胞密度和目的蛋白产量，为接下来的rhTNFR-Fc融合蛋白的工业化生产奠定基础。选择不同的冻存剂对CHO细胞的冻存和复苏有影响。与常规液氮法冻存的细胞相比较,2℃~8℃冰箱中短时间内保存CHO细胞悬液在快速恢复细胞生长状态方面存在较大优势,在生产过程循环周期较紧张的情况下可作为辅助方法用于保障细胞传代的延续。CHO细胞复苏试验中，选用40℃下先溶解，再37℃恒温水浴锅中复苏的方法,加快了冻存细胞的解冻时间，提高了细胞的存活率。CHO细胞经过逐步减血清悬浮驯化，细胞的适应状态较直接无血清驯化的状态好，细胞密度能达到2.51×106cells/mL，比无血清驯化细胞密度提高将近1.6倍。细胞驯化悬浮过程中，添加半胱氨酸盐酸盐能够促进细胞的生长，由表达水平分析显示，添加半胱氨酸盐酸盐能提高细胞表达，与对照组相比表达水平约提高1.7倍。与此同时，培养基中添加硫酸葡聚糖有助于降低细胞结团，同时提高细胞密度，并确定硫酸葡聚糖的最佳添加浓度为50μg/mL。基础培养基研究实验中，CHO细胞在BD、GIBCO和LONZA及E001等四种基础培养基上生长，细胞培养5天后进行纯化，细胞在E001培养基的表达为41.94mg/L，而LONZA培养基培养的产物表达量为29.96mg/L。CHO细胞在表达期温度控制在37℃时，蛋白表达量要高于控温在32℃时的细胞蛋白表达量。通过表达期渗透压实验发现，细胞表达期的渗透压控制在390mOsm/kg较合适。培养方式的研究实验表明，补料分批培养中补加F001能够更好的促进生长及表达，产物表达比分批培养提高了一倍多。最终确定CHO细胞适合补料分批培养方式，基础培养基选择E001培养基，补料培养基选择F001培养基。通过本课题的研究,对表达重组人II型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的CHO细胞的悬浮驯化及培养工艺的优化,对于提高细胞密度和产物产量具有十分重要的作用和意义。为接下来进行rhTNFR-Fc融合蛋白的工业化生产奠定基础。