目的:葛花为豆科植物野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)或甘葛藤(P.thomsoii Beeth.)的未开放的花蕾,异名葛条花,是我国常用的解酒中药。近年来,研究报道葛花解酒保肝的主要有效成分为异黄酮类物质,与本实验前期研究相吻合;实验对葛花黄酮部位进行了质量控制、药效学以及作用机制的研究,为葛花质量标准制定、临床应用及资源开发利用提供理论依据。方法:葛花药材经提取分离纯化得到葛花黄酮部位,分别采用薄层色谱法(TLC)和紫外-可见分光光度法(UV)对葛花黄酮部位进行主要成分鉴别和总黄酮含量测定;运用高效液相色谱(HPLC)法测定葛花黄酮部位中鸢尾苷、鸢尾黄素-7-O-木糖基葡萄糖苷、鸢尾苷元的含量,并建立葛花黄酮部位的色谱指纹图谱。实验选择ICR小鼠建立急性酒精中毒模型,以葛花黄酮部位高、中、低剂量进行预防性干预,通过观察葛花黄酮部位对醉酒小鼠翻正反射、学习记忆能力和运动协调性的影响和测定小鼠血中乙醇浓度、肝中乙醇脱氢酶(ADH)活性,分析葛花黄酮部位对急性酒精中毒的保护作用;选择Wistar大鼠建立急慢性酒精性肝损伤模型,以葛花黄酮部位高、中、低剂量进行预防性干预,检测急慢性酒精性肝损伤大鼠的血清与肝脏中各项生化指标和肝脏病理结构的影响,分析葛花黄酮部位对急慢性酒精性肝损伤大鼠的肝脏保护作用;运用酶联免疫ELISA法和荧光定量PCR法检测慢性酒精性肝损伤大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的含量和肝脏中核因子相关因子-2(NRF-2)、核转录因子-κB(NF-κB)、TGF-β1、CD68的mRNA表达,对慢性酒精性肝损伤大鼠的肝脏保护作用机制进行初步研究分析。结果:葛花黄酮部位经提取分离纯化后,用TLC进行定性鉴别,专属性强,斑点清晰明显,分离度较好;建立UV法测定葛花黄酮部位中总黄酮含量,以鸢尾苷为对照的回归方程Y=0.0742X+0.0123,相关系数r=0.9995。方法学验证结果:精密度、重复性、稳定性均符合规定;加样回收率为97.24~102.32%,RSD为1.80%。葛花黄酮部位的总黄酮含量为93.24%。建立HPLC法同时测定葛花黄酮部位中3种成分含量的方法,鸢尾黄素-7-O-木糖基葡萄糖苷的回归方程y=2840528.18x–29185.93,相关系数r=0.9999;鸢尾苷的回归方程y=4444648.34x–139596.80,相关系数r=0.9999;鸢尾苷元的回归方程y=7328041.12x–61890.82,相关系数r=0.9998。方法学验证结果:精密度、重复性、稳定性均符合规定;鸢尾黄素-7-O-木糖基葡萄糖苷加样回收率为98.88~103.44%,RSD为1.80%;鸢尾苷加样回收率为97.26~101.19%,RSD为1.56%;鸢尾苷元加样回收率为98.80~102.11%,RSD为1.40%。10批葛花黄酮部位中三种成分平均含量:鸢尾黄素-7-O-木糖基葡萄糖苷为15.78%,鸢尾苷为45.08%,鸢尾苷元为13.05%。通过分析10批葛花黄酮部位HPLC图谱,建立了葛花黄酮部位指纹图谱,标定了14个共有峰,相似度为0.952-0.999。急性酒精中毒实验结果表明:与模型组比较,葛花黄酮部位组小鼠的醉酒潜伏期时间延长(P<0.05),睡眠时间(P<0.05)和醒酒时间(P<0.05)缩短,并成一定的量效关系。在醉酒兴奋期,葛花黄酮部位可加强学习记忆能力,延长触电潜伏期时间(P<0.01),减少触电次数(P<0.05),并提高醉酒小鼠的运动协调性(P<0.05)。葛花黄酮部位组小鼠的血清乙醇含量(P<0.05)有所降低,但对肝中乙醇脱氢酶活性没有影响。急性酒精肝损伤药理实验结果表明:与模型组比较,葛花黄酮部位能有效降低急性酒精性肝损伤大鼠的肝脏指数(P<0.01)、降低血清中ALT(P<0.01)、AST(P<0.01)的活性和肝脏MDA(P<0.01)的含量,使肝脏损伤状况有不同程度的好转,说明葛花黄酮部位具有保护急性酒精性肝损伤的作用。慢性酒精肝损伤药理实验结果表明:葛花黄酮部位能有效降低慢性酒精性肝损伤大鼠的肝脏指数(P<0.01)、降低血清中ALT(P<0.01)、AST(P<0.01)、AKP(P<0.05)的活性和肝脏MDA(P<0.01)的含量,升高肝脏SOD(P<0.01)、GSH(P<0.05)的含量,降低肝脏损伤的程度,说明葛花黄酮部位能有效保护慢性酒精性所致的肝损伤。慢性酒精肝损伤机制实验结果表明:葛花黄酮部位可以显著抑制大鼠肝脏CD68的mRNA的表达(P<0.01),降低肝巨噬细胞的活化,下调NF-κB的mRNA的表达(P<0.01),抑制炎症的发生,减少炎性因子和炎性介质(TNF-α(P<0.01)、TGF-β1(P<0.01)、IL-6(P<0.01)、IL-8(P<0.05))的释放,降低炎性细胞对正常肝脏细胞的攻击;又可以下调TGF-β1的mRNA表达(P<0.05),降低肝细胞纤维化的程度,抑制肝损伤的加重;同时上调NRF-2的mRNA表达(P<0.01),激活下游抗氧化通路,发挥肝脏保护作用。结论:本实验建立了葛花黄酮部位质量控制方法、对其解酒保肝药效学及作用机制进行了研究,建立了HPLC指纹图谱并对其中三种化学成分鸢尾苷、鸢尾黄素-7-O-木糖基葡萄糖苷、鸢尾苷元进行了含量测定,通过急性酒精中毒、急慢性肝损伤实验研究了葛花黄酮部位的解酒保肝作用,通过ELISA法和荧光定量PCR法对葛花黄酮部位的肝脏保护作用机制进行初步研究探讨,为葛花质量标准制定、临床应用和解酒中药的开发研究提供理论依据。