高毒力杀葱蝇真菌的筛选及其培养特性的研究

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葱蝇Delia antigua是一种危害大葱、小葱、洋葱、大蒜、青蒜、韭菜等百合科蔬菜的世界性害虫。由于该害虫多数时间在土中栖息,危害的周期较长,是国内外公认的较难防治的一种害虫。在葱蝇的防治中,目前主要使用化学农药,由于其见效快、杀虫方式多样、杀虫谱广等优点被生产上广泛应用。然而化学药剂普遍存在残留期长,选择性差,污染环境以及害虫易产生抗性等问题。随着人们环保意识的增强以及对各种农副产品的农药污染问题的重视,化学农药的使用受到限制。而害虫的生物防治技术由于其专一性强、害虫不易产生抗药性、对人畜安全等优点,已成为人们研究的热点。近年来,各种真菌农药制剂陆续出现,白僵菌、绿僵菌等真菌生物农药不断被人们开发利用,但高效的杀葱蝇的真菌菌株极少。本研究的目的是利用本实验已有的微生物资源,筛选对葱蝇侵染力较高的真菌菌株;确定该菌株生长和产孢最适培养条件和营养需求;实验室内盆栽实验初步测定该菌株对葱蝇的防治效果,为该真菌大规模发酵和田间应用提供基础数据。研究的主要内容包括筛选对葱蝇毒力较高的真菌菌株;研究所筛选出的菌株对葱蝇各个时期的毒力;研究该菌株的生物特征、确定其分类学地位;探索该菌株的最适培养条件以及营养需求,在此基础上,初步确定其培养基成分;最后以室内盆栽实验测定该菌株的生防效果。论文主要研究成果如下:(1)利用葱蝇幼虫接种实验从本实验室的菌种库中成功筛选出一株对葱蝇幼虫具有较高毒力的CQBb119菌株。结合该菌株形态特征、生物学特性以及菌株ITS序列比对的结果进行菌株鉴定,确定了该菌株为球孢白僵菌(Beauveria bassiana)。(2)以浸渍法测定了球孢白僵菌CQBb119菌株对葱蝇各个虫态的毒力,结果表明该菌株对葱蝇的幼虫、成虫、蛹均有一定的毒力,在1.0×109孢子·mL-1浓度的孢子悬浮液处理下,14d后葱蝇各虫态的累积死亡率分别达到87.78%、46.67%、32.31%,幼虫的LT50为4.94d,可以作为杀葱蝇的潜力菌株。(3)采用单因素实验对CQBb119菌株的最适培养温度、pH、最适碳源、氮源以及微量元素对产孢的影响进行了研究,结果显示CQBb119菌株最适培养温度为25℃,固体平板培养的最适pH值为6.0;最佳碳源、氮源、微量元素分别为麦芽糖、酵母粉、Mn2+。采用正交实验对营养成分进行优化,结合成本考虑,得出CQBb119固体培养最佳的培养基组分为米粉10.0g/L、硝酸钾2.5 g/L、氯化钙0.01g/L、酵母膏5.0 g/L、氯化钾0.5 g/L、七水硫酸镁0.5 g/L、磷酸二氢钾0.5 g/L、磷酸氢二钠0.65 g/L、琼脂粉20 g/L。(4)室内盆栽葱蝇的三种寄主植物韭菜、洋葱和小葱,将3龄葱蝇幼虫接种到土壤中,使用CQBb119菌株处理,14d后观察葱蝇幼虫的活虫数。室内盆栽实验结果表明,使用CQBb119菌株孢子悬浮液处理能够有效控制洋葱、韭菜、小葱上的葱蝇的危害,三者虫口减退率均能达60%以上,说明CQBb119菌株对于不同的寄主上的葱蝇,均能起到较好地防治效果,可以使用CQBb119菌株防治葱蝇。结论:本次试验成功的筛选出对葱蝇具有较高毒力的球孢白僵菌CQBb119菌株,研究了该菌株对葱蝇各个虫态的毒力,并探索该菌株的培养特性,初步测定其防治效果。结果表明,CQBb119菌株培养特性良好,对葱蝇各个虫态均具有良好的防治效果,且盆栽实验中防治效果良好,是一株可用于葱蝇防治田间应用的具有开发应用价值的生防菌株。
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