巴贝斯虫病(Babesiosis)一种通过蜱虫传播的血液性原虫病。其中,犬吉氏巴贝斯虫是我国最常见的犬巴贝斯虫病的病原之一,患犬表现出发热、贫血、血红蛋白尿等症状,严重时可导致死亡。1985年,第一例巴贝斯虫病例在我国发现并确诊,而近年来伴侣犬、警犬感染巴贝斯虫的病例越来越多,从各地兽医院接诊的情况也可以证实该病在我国的广泛流行。目前并没有疫苗可以来预防犬吉氏巴贝斯虫病,而且在该病的诊断治疗上,方法比较单一。热休克蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)是在自然界中广泛存在的一类热应激蛋白质,该蛋白具有高度保守性,可诱发机体产生抗体。相关研究表明,HSP70蛋白既可以作为巴贝斯虫检测的一种诊断工具,也可以作为疫苗的候选蛋白,因此,研究HS70基因及其编码蛋白已成为诊断和预防犬吉氏巴贝斯虫病的热点。本研究工作主要包括以下两部分:1.犬吉氏巴贝斯虫TRAP基因和HSP70基因的克隆与序列分析本研究从南京地区贫血病犬血液中检测出犬吉氏巴贝斯虫,对TRAP基因和HSP70基因进行克隆和序列分析,并与亚洲其他地区分离株进行分析比较。结果显示,南京地区分离株TRAP和HSP70基因序列的相似性均在99%以上。南京分离株与台湾和日本分离株关系密切,与印度分离株差异较大。且相对来说,HSP70基因保守性更高,适合作为建立诊断方法和研发疫苗的靶基因,而TRAP基因更适合进行不同分离株的遗传多样性分析和研究犬吉氏巴贝斯虫的流行病学。这些结果表明,TRAP和HSP70基因对犬吉氏巴贝斯虫的遗传多样性分析具有重要价值。2.犬吉氏巴贝斯虫HSP70基因的原核表达及抗原性分析将南京分离株的HSP70基因克隆到pET-32a质粒中,将重组质粒转化到BL21(DE3)后,利用IPTG诱导表达得到了重组犬吉氏巴贝斯虫HSP70蛋白。用纯化好的重组HSP70蛋白免疫6周龄BalB/C小鼠制备抗血清,并分析重组蛋白的免疫原性及反应原性。通过Western blot分析,结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。不但能够和天然感染犬吉氏巴贝斯虫的病犬的血清发生特异性反应,而且也能刺激小鼠产生高水平的抗体。