嗜酸氧化亚铁硫杆菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）是最常见的浸矿细菌，能够利用矿物中的铁与硫作为能源物质，化能自养，好氧嗜酸，革兰氏阴性菌。 硫氰酸酶是A.ferrooxidans菌硫氧化系统中重要的一个酶，可以催化硫代硫酸盐中的硫原子到氰化物，生成亚硫酸盐和硫氰酸盐。其在生物学中的作用仍然存在很大的争议，目前公认的硫氰酸酶的作用主要包括：氰化物的解毒作用；在铁硫簇蛋白形成中起辅酶基团；以及在硫胺，硫尿苷或烟碱乙酸胆碱的生物合成中转移硫。硫氰酸酶具有高度的保守性，其亚基呈现单一或者重复衔接结构，并且在亚基的C-末端包含有可参与反应的半胱氨酸，其结构常作为多亚基蛋白质的模型。核酸序列分析发现A.ferrooxidans中硫氰酸酶的C-末端含有一个结合铁硫簇的保守亚基（Cys-XX-Trp-XX-Cys）。本论文从A。ferrooxidans中克隆出硫氰酸酶的基因，表达并用一步亲和层析法纯化出蛋白，表达的蛋白分子量为21KDa。通过紫外-可见光扫描及电子顺磁共振结果证实了硫氰酸酶蛋白含有铁硫簇，我们通过定点突变构建了硫氰酸酶的突变质粒：C92A、C101A、C147A、C197A、C203A。结果证实C92A、C101A、C197A、C203A是硫氰酸酶蛋白结合铁硫簇的重要位点。 丝氨酸乙酰转移酶催化乙酰-CoA和L-丝氨酸生成O-乙酰丝氨酸，丝氨酸乙酰转移酶是A.ferrooxidans菌中半胱氨酸合成的关键酶，也是硫循环中重要的一个酶，因为半胱氨酸是硫酸盐同化作用中的第一个含硫氨基酸，也是无机硫进入有机体的必经途径。本文从A.ferrooxidans中克隆丝氨酸乙酰转移酶的基因，表达，并通过一步亲和层析法纯化出蛋白。表达的蛋白分子量为28KDa，具有较高的体外酶活性。据我们所知，这是首次在Escherichia coli中表达来源于A.ferrooxidans的丝氨酸乙酰转移酶。 由iscSUA操纵子编码的三个蛋白IscS（半胱氨酸脱硫酶），IscU（支架蛋白）和IscA（铁离子伴侣）参与了A.ferrooxidans铁硫簇的组装，但是机理至今仍不清楚。最近有研究表明硫氰酸酶也能够催化L-半胱氨酸脱硫，为体外组装铁硫簇提供硫。本文通过体外组装铁硫簇实验，以硫氰酸酶代替半胱氨酸脱氢酶，并通过一系列对比试验，初步证实了硫氰酸酶确实能够催化L-半胱氨酸脱硫，为体外组装铁硫簇提供硫。