卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素的一种，其被广泛添加到动物饲料中，以防止动物机体受到细菌的感染。但是不遵守休药期规定及不合理的用药等情况，都会造成卡那霉素在动物组织中的残留。如果人类长期摄取含有卡那霉素残留的食品，将会对人体造成严重的耳毒性或肾毒性损害。所以建立ELISA检测方法来检测卡那霉素在动物源性食品中的残留是十分必要的。制备卡那霉素完全抗原及抗卡那霉素单克隆抗体是ELISA检测方法建立的核心步骤，直接关系到检测结果的敏感性及准确度。本实验分析了卡那霉素的结构特性及免疫学特性，用两种方法制备了卡那霉素人工抗原，并对制备结果进行了鉴定；用杂交瘤技术制备了抗卡那霉素单克隆抗体，并对其免疫学特性进行鉴定。以上工作为动物源性食品中卡那霉素残留的免疫学快速检测方法建立奠定了坚实的基础。本实验研究内容具体如下：1、卡那霉素人工抗原的制备及鉴定。将卡那霉素标准品与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联，制备人工抗原。利用两种不同的偶联方法：碳二亚胺法(EDC)和戊二醛法(GDA)，分别制备出KAN-BSA（作为免疫原），KAN-GDA-OVA（作为包被原）。利用SDS-PAGE凝胶电泳和动物免疫试验，鉴定了完全抗原偶联情况。结果显示：偶联物的蛋白条带相比载体蛋白的条带有明显的滞后性；制备的卡那霉素完全抗原能刺激小鼠机体产生相应抗体，且抗血清效价均达到1:2.56×104，其中1号小鼠的IC50值为22.28ng/mL，说明完全抗原免疫原性良好，抗原制备成功。2、抗卡那霉素单克隆抗体的制备及鉴定。利用细胞融合技术，将1号小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS0在PEG的作用下融合，制备杂交瘤细胞。利用间接ELISA及间接竞争ELISA的方法筛选阳性克隆。选择能稳定传代的阳性杂交瘤细胞株，用有限稀释法对其进行克隆化，经过三次亚克隆，得到2株能稳定分泌抗卡那霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞——1E1、2B12，并将其扩大培养，及时冻存。采用小鼠体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体。用棋盘法做间接ELISA试验，进行最佳包被浓度的选择，结果显示包被原KAN-GDA-OVA的最佳工作浓度为2.5μg/mL。用最佳包被浓度包被酶标板，采用间接ELISA及间接竞争ELISA的方法测定制备的抗卡那霉素单克隆抗体的效价及敏感性，并根据间接竞争ELISA的数据结果对1E1进行标准曲线的绘制，得到回归方程y=-0.3793x+0.8084，IC50为6.5024ng/mL。最后对所制备的抗卡那霉素单克隆抗体进行一系列的特性鉴定，包括亚型鉴定、亲和力的测定及特异性测定等。其结果为：单抗为IgG1型，亲和常数为1.06×1011L/mol，抗体除了与TOB（58.06%）有交叉反应外，与其他常见抗生素交叉反应均小于0.65%。本研究通过一系列的试验获得了高效、高亲和力、高特异性的抗卡那霉素单克隆抗体。