斑马鱼周期蛋白C与早期胚胎发育相关研究

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个体发育从受精卵开始,经过卵裂阶段的细胞增殖后,进入到胚层分化、组织和器官形成阶段。卵裂阶段的胚胎细胞呈现同步化的分裂节律,鲜有基因转录活动,其发育由源自卵母细胞发生期间合成的蛋白质和mRNAs调控。进一步的发育需要启动合子型基因的表达才能进行。鱼类和两栖类由母型调控向合子型调控过渡发生在中囊胚形成阶段,称为中囊胚过渡(midblastula transition,MBT),胚胎细胞周期时相的组成在此期间发生变化,首次出现G1期,周期时限延长,细胞分裂的同步性丧失,大批合子型基因活化转录也在此时开始。目前对这一早胚发育的重要事件的分子机制还缺乏了解。高等真核生物的周期蛋白C(cyclin C)的mRNA和蛋白质水平在G1早期达到最高,而且用周期蛋白C基因来转化不能产生G1期周期蛋白(CLNs)的酵母突变株,能够使该突变株恢复生长,说明周期蛋白C对细胞在G1期的行为具有调控作用。此外,cyclin C与其依赖性激酶形成的cyclin C/Cdk3复合体细胞从G0期(静止期)进入G1期起到关键的调控作用。cyclin C与另一依赖性激酶cdk8形成的cyclin C/Cdk8复合体除通过磷酸化作用于通用转录因子外,还是构成RNA聚合酶Ⅱ的碳末端(CTD)区域亚基之一,RNA聚合酶Ⅱ大亚基CTD磷酸化是转录启始的关键性调控因素。周期蛋白C联系着细胞周期调控和转录调控两个方面,而这两方面的结合正是揭示中囊胚过渡机制的关键。在斑马鱼中,周期蛋白C在胚胎发育早期表达的时空特征及其在早期发育乃至中囊胚过渡中的作用尚未被研究过。实验室在斑马鱼中获得并提交了周期蛋白C cDNA序列(GeneBank登陆号:AY450302),本研究经过斑马鱼周期蛋白C经序列分析,表明它和人类有很高的同源性,同时在核苷酸水平和蛋白质水平都相当保守,从侧面说明该基因的重要性。Northern和整胚原位杂交实验表明该基因既有母型表达又有合子型表达,在早期胚胎发育过程中,这个基因的转录本都是普遍性表达,其表达初始是分散分布的,之后集中在头部和躯干部。在1-4细胞过表达cyclin C,发现过表达导致头部和尾部发育畸形;同时在蛋白水平上检测到部分外源蛋白在中囊胚转换后有降解现象产生。表明cyclin C在斑马鱼早期胚胎发育中是一个必需的基因,参与了早期发育机制。
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