【摘 要】
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[目的]肿瘤演进过程中,肿瘤细胞与免疫细胞的相互作用备受关注。在肺癌中含量丰富的肿瘤相关巨噬细胞已成为研究肿瘤发生发展和治疗的新靶标。ELR+趋化因子与CXCR2构成的信号轴（CXCLs-CXCR轴）作为肿瘤细胞和周围基质细胞相互作用的重要介质,在肺癌的早期诊断、发展和侵袭转移,治疗及耐药等过程中发挥重要作用。我们前期研究发现PGE2可以诱导巨噬细胞活化高表达CXCL7,本研究通过双向调控受体CX
【基金项目】
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国家自然科学基金（82060423）；
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[目的]肿瘤演进过程中,肿瘤细胞与免疫细胞的相互作用备受关注。在肺癌中含量丰富的肿瘤相关巨噬细胞已成为研究肿瘤发生发展和治疗的新靶标。ELR+趋化因子与CXCR2构成的信号轴（CXCLs-CXCR轴）作为肿瘤细胞和周围基质细胞相互作用的重要介质,在肺癌的早期诊断、发展和侵袭转移,治疗及耐药等过程中发挥重要作用。我们前期研究发现PGE2可以诱导巨噬细胞活化高表达CXCL7,本研究通过双向调控受体CXCR2在肺癌细胞系中的表达,阐明CXCL7/CXCR2轴对肺癌细胞的增殖和侵袭迁移能力的影响及可能机制。并通过检测肺癌组织标本中CXCL7的表达水平,明确CXCL7与肺癌中不良临床病理因素的关系。[方法]（1）采用细胞因子芯片筛选PGE2刺激后巨噬细胞Raw264.7差异分泌的细胞因子,确定CXCL7为研究因子;（2）检测肺癌组织标本中CXCL7的表达水平,分析CXCL7与肺癌中不良临床病理因素的关系;（3）免疫印迹法（Western blotting,WB）检测A549,H2122,H226,SK-MES-1,XLA-07 和 XLA-JT 六株肺癌细胞上CXCL7受体CXCR2的表达情况;（4）CCK8实验检测CXCL7对CXCR2表达水平不同的肺癌细胞增殖作用的影响;使用细胞划痕实验、Transwell实验评估CXCL7对CXCR2表达水平不同的肺癌细胞侵袭、迁移能力的改变;（5）WB检测CXCL7刺激后肺癌细胞COX2和EMT相关蛋白和AKT,p-AKT的表达差异;（6）选择CXCR2高表达和CXCR2低表达的肺癌细胞株,采用慢病毒转染细胞技术分别构建CXCR2干扰稳转株和CXCR2过表达稳转株,荧光定量PCR和WB验证转染效率;CCK8实验、细胞划痕实验和Transwell实验进一步验证CXCL7刺激下稳转株增殖、侵袭迁移功能的改变。[结果]（1）PGE2诱导巨噬细胞Raw264.7高表达趋化因子CXCL7:基因芯片结果显示,PGE2刺激后巨噬细胞Raw264.7表达上调（≥1.5倍）的细胞因子有6个;表达下调（≤0.67倍）的细胞因子有12个。其中趋化因子CXCL7表达上调较明显,故选其作为研究靶标,探讨其对肺癌生物学功能的影响及可能机制;（2）CXCL7在肺癌中多高表达,且与不良临床病理因素相关。75例肺癌组织标本的免疫组化结果表明,CXCL7在肺腺癌（73.68%）和肺鳞状细胞癌（70.59%）中多为阳性表达;且CXCL7的表达与肺癌患者的TNM分期,淋巴结转移和远处转移呈正相关,与患者组织类型、年龄、性别及肿瘤大小无关;（3）六株非小细胞肺癌细胞株均存在CXCR2蛋白表达。其中,A549、H2122、SK-MES-1和XLA-JT 细胞高表达 CXCR2,而 XLA-07 和 H226 低表达 CXCR2;（4）CXCL7/CXCR2轴可促进肺癌细胞的侵袭迁移,而无促增殖作用:CCK8结果显示各浓度CXCL7作用下,高表达CXCR2的A549细胞和低表达CXCR2的XLA-07细胞增殖能力均无明显变化;细胞划痕实验和Transwell实验结果均显示CXCL7可促进CXCR2高表达细胞A549的侵袭迁移,而对CXCR2低表达细胞XLA-07作用不明显。在双向调控CXCR2表达的A549干扰株和XLA-07过表达株中观察到一致的结果;（5）CXCL7/CXCR2轴促进肺癌细胞COX2表达,并诱导EMT的发生促进肺癌细胞侵袭迁移:免疫印迹实验显示,CXCL7可通过调控EMT相关蛋白E-Cad和N-Cad的表达,促进高表达CXCR2细胞A549的侵袭迁移,而对CXCR2低表达细胞XLA-07无明显促进作用;（6）CXCL7/CXCR2轴通过促进AKT通路影响肺癌细胞侵袭迁移:高表达CXCR2的A549肺癌细胞在CXCL7作用下p-AKT表达明显升高,而低表达CXCR2的XLA-07肺癌细胞p-AKT表达未见明显变化。[结论]肿瘤细胞分泌的PGE2可刺激巨噬细胞高表达趋化因子CXCL7;CXCL7/CXCR2轴反哺促进肺癌进展,但与其增殖无明显关系;并可能通过激活AKT通路诱导肺癌细胞EMT进程,进而促进肺癌细胞的侵袭迁移。
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