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谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidases, GPXs)是植物体内重要的抗氧化物酶之一,对清除植物体内过量积累的自由基、保护生物膜具有重要作用。对于一种植物GPXs的研究,从单基因的克隆发展到对GPXs基因家族的研究,目前主要包括基因的克隆、进化树分析以及RNA水平的表达模式分析等。本实验室以盐芥为研究材料进行了ThGPXs的相关研究,已经获得了组成ThGPXs中8个成员的基因序列,并采用qRT-PCR对其应答逆境胁迫的表达特征进行了研究。抗氧化酶主要在蛋白水平上发挥作用,因此在蛋白质水平上研究的ThGPXs表达变化,对于阐释ThGPXs的功能具有更为重要的意义。基于本实验室前期的研究结果,本研究根据ThGPXs的氨基酸序列特点,制备了ThGPXs特异抗体。以盐芥为材料,构建了ThGPX8的原核表达载体,对蛋白表达条件进行了初步研究。探索将双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)与Western blotting结合的技术研究盐芥ThGPXs的特异表达特点；构建了ThGPXs与GFP融合的植物表达载体,为ThGPXs的亚细胞定位研究奠定基础。获得的研究结果如下：1.依据ThGPXs氨基酸序列特点,制备了两个ThGPXs的多肽抗体TsGPX-A和TsGPX-B,经SDS-PAGE检测,具有较好的特异性。2.构建ThGPX8与含有His-tag的pET-28a (+)原核表达载体,探索ThGPX8诱导表达的最佳条件,采用Western blotting对ThGPX8在不同条件下的表达量进行了鉴定分析。结果表明,成功构建了pET-ThGPX8,经IPTG诱导表达了1个约23kD的蛋白,该蛋白质在37℃诱导5h可获得较高的表达量。研究结果为进一步分离纯化ThGPX8、进行蛋白质表达和功能的研究奠定了基础。3.提取盐芥总蛋白,进行2-DE分离蛋白后,采用Western blotting方法检测ThGPXs,比较了碱性磷酸酶和化学发光法检测ThGPXs效果,初步建立了2-DE和Western blotting结合检测ThGPXs表达的实验体系。4.以盐芥为材料,以20%PEG6000处理6h、24h和48h,提取叶片总蛋白,以未处理为对照,采用2-DE和Western blotting结合技术初步研究了干旱逆境胁迫下ThGPXs的表达特征。在预测的ThGPXs分子量范围内,获得了表达量差异在2.0以上的蛋白点15个。5.分别构建ThGPXs基因中的(ThGPX1、ThGPX2、ThGPX3、ThGPX6、 ThGPX7)与报告基因GFP融合的植物表达载体pRTL-ThGPXs,为进一步的ThGPXs亚细胞定位研究奠定了基础。本研究通过构建ThGPX8的原核表达载体、探索2-DE和Western blotting结合技术研究和鉴定特异蛋白的表达,旨在通过建立实验体系,为深入研究ThGPXs响应逆境的蛋白表达特征奠定基础。