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目的:利用si RNA干扰技术干扰胱硫醚β-合成酶(cystathionineβ-synthase,CBS)基因并构建细胞氧糖剥夺再灌注(Oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)模型,探讨OGD/R和CBS基因干扰后SH-SY5Y细胞自噬和凋亡情况及相关信号通路变化。方法:构建OGD/R模型,体外模拟缺血再灌注过程,根据氧糖剥夺和再灌注时间不同共设9组,分别为正常对照组,氧糖剥夺4h/再灌注12h组(4h/12h组),氧糖剥夺4h/再灌注24h组(4h/24h组),氧糖剥夺8h/再灌注12h组(8h/12h组),氧糖剥夺8h/再灌注24h组(8h/24h组),氧糖剥夺12h/再灌注12h组(12h/12h组),氧糖剥夺12h/再灌注24h组(12h/24h组),氧糖剥夺24h/再灌注12h组(24h/12h组),氧糖剥夺24h/再灌注24h组(24h/24h组)。利用透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)观察各组细胞OGD/R后细胞内自噬小体形成情况;脂质体转染法将靶向CBS基因的si RNA转入SH-SY5Y细胞内,同时构建OGD/R模型,氧糖剥夺4h/再灌注24h。将细胞分为3个组,分别为CBS干扰组,OGD/R组和CBS干扰+OGD/R组。CBS干扰组以阴性对照(与干扰组siRNA有相同的碱基组成但与靶mRNA无同源性的一段核苷酸序列)作为对照,OGD/R组以正常细胞作为对照,CBS干扰+OGD/R组以阴性对照+OGD/R组作为对照组。为观察转染试剂对正常细胞的毒性作用,特增加正常对照组作为参照。以上各组各设3个复孔并进行3次独立重复实验;蛋白印迹法鉴定CBS基因干扰效率,并检测各组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1和信号通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达水平,以及凋亡信号通路中NF-κBp65、COX-2蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。结果:1.透射电镜观察细胞内自噬小体:除正常对照组和氧糖剥夺4h/再灌注12h组未观察到自噬小体外,其余各组均在胞质内观察到了较多自噬小体;2.CBS基因干扰效率:蛋白印记法检测CBS蛋白表达,结果显示,干扰组与阴性对照组比较CBS蛋白表达量明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05),阴性对照组与正常对照组比较CBS蛋白表达水平并无明显变化(P>0.05)。3.自噬相关蛋白及相关信号通路蛋白表达:3.1 CBS干扰组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR蛋白表达水平与阴性对照组比较均无统计学差异(P>0.05)。3.2 OGD/R组与正常对照组比较,OGD/R组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Beclin-1蛋白表达无显著差异(P>0.05),p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),NF-κBp65、COX-2蛋白表达水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.3 CBS干扰+OGD/R组与阴性对照+OGD/R组比较,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR均无显著差异(P>0.05)。4.细胞凋亡检测结果:4.1 CBS干扰组细胞凋亡率与阴性对照组比较无统计学差异(P>0.05)。4.2 OGD/R组与正常对照组比较,OGD/R组细胞凋亡率明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。4.3 CBS干扰+OGD/R组与阴性对照+OGD/R组比较,细胞凋亡率无显著差异(P>0.05)。结论:OGD/R能够明显诱导SH-SY5Y细胞发生自噬和凋亡,且可能与Akt/mTOR及NF-κBp65/COX-2信号通路相关;CBS基因干扰对细胞自噬和凋亡均无明显影响。