【摘 要】
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目的本研究通过对一例疑诊肢带型肌营养不良2Q型患者进行致病性研究,从基因组水平明确诊断,初步探讨该病的致病机理,并为肢带型肌营养不良的临床诊断、遗传咨询提供相应的帮助。方法1.首先对疑诊肢带型肌营养不良患儿的临床资料、血生化结果、电生理及影像学的资料进行收集。2.依据患儿临床特点予以肌病panel二代测序（next-generation sequencing,NGS）。3.检索千人基因组计划（Ge
【基金项目】
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项目名称:肌营养不良基因诊断及新突变致病性研究,项目合同编号:81760215,项目来源:国家自然科学基金,项目起止时间:2018.1-2021.12
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目的本研究通过对一例疑诊肢带型肌营养不良2Q型患者进行致病性研究,从基因组水平明确诊断,初步探讨该病的致病机理,并为肢带型肌营养不良的临床诊断、遗传咨询提供相应的帮助。方法1.首先对疑诊肢带型肌营养不良患儿的临床资料、血生化结果、电生理及影像学的资料进行收集。2.依据患儿临床特点予以肌病panel二代测序（next-generation sequencing,NGS）。3.检索千人基因组计划（Genome l000）和单核苷酸多态性数据库（SNP）排除多态性位点;参照ACMG遗传变异分类标准与指南,查阅相关数据库,明确突变位点及其致病性有无文献报道;对可疑的致病变异位点进行Sanger测序,且行家系验证,分析是否存在家系共分离,绘制家系图;采用生信软件对非多态性且无致病性报道的突变位点进行预测,看突变是否影响蛋白的功能。4.提取先证者肌肉组织RNA进行转录组测序,明确可疑致病突变是否影响了肌肉组织m RNA的表达。5.行苏木精-伊红染色（HE）及免疫组织化学染色（IHC）分析来了解患儿肌肉病理改变及相关的蛋白质表达情况。6.活检取患儿皮肤行原代成纤维细胞培养,予以可疑病变蛋白的免疫组化,明确患儿皮肤的成纤维细胞中plectin蛋白表达。结果1.患儿爬楼费劲3年,伴起蹲困难,不能跳,跑步不协调,智力正常;肩胛带肌及骨盆带肌可见轻度萎缩,上肢近端肌力4级,远端肌力4+级,下肢近端肌力4级,远端肌力4+级,肌张力正常,Gower征（-）;血清肌酸激酶（CK）1121U/L;肌电图提示:神经源性损害。双下肢骨骼肌MRI提示:所有肌群均出现对称性2级脂肪浸润。2.肌病panel二代测序发现该患儿PLEC基因存在31号外显子c.6428C>T和32号外显子c.13192G>A复合杂合突变。3.千人基因组计划及单核苷酸多态性数据库提示突变位点为非多态性位点;检索相关数据库,突变位点与致病性均无文献报道,为新发突变;利用Sanger测序验证先证者PLEC基因复合杂合突变分别来源于父亲的c.13192G>A和母亲的c.6428C>T杂合突变,父母均无相关临床表现,存在家系共分离。综合分析生信软件预测结果提示:c.13192G>A和c.6428C>T复合杂合突变可能致病。4.转录组测序结果显示患儿肌肉组织m RNA表达未见明显改变。5.肌肉组织苏木精-伊红染色可见核链形成及肌核聚集;免疫组织化学染色示plectin蛋白在肌浆中聚集。6.皮肤原代成纤维细胞呈梭型或不规则形状,细胞胞体相对丰满、细长,胞膜清晰可见。免疫组织化学显示plectin蛋白在皮肤成纤维细胞中聚集。结论1.根据临床表现及相关检查结果,临床诊断该患儿符合肢带型肌营养不良2Q型,属于常染色体隐性遗传性疾病。2.首次报道PLEC基因31、32号外显子c.6428C>T和c.13192G>A复合杂合错义突变可导致肢带型肌营养不良2Q型,扩充了PLEC基因的突变谱,并为以后LGMD2Q型的临床诊断提供帮助。3.应用MRI可了解病变肌肉中脂肪比例、受累肌群及严重程度,可协助判断LGMD2Q的病情。4.基于临床表现,应用多种生信软件预测、借助转录组测定m RNA的表达、对病理活组织检测等多种手段可提高判断新发突变的致病性的准确度。
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