竹叶黄酮特征性成分的分离制备及其酰化产物的抗辐射研究

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本文以竹叶黄酮商品制剂(BLF-d24)为原料,分别采用SMB和DAC两种制备方法对4种竹叶碳苷黄酮(荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷)进行分离制备,并分析比较这两种技术的工业化应用前景。同时,对分离纯化得到的荭草苷和异荭草苷进行酶法酰化修饰,并对酰化产物(荭草苷月桂酸酯)的辐射防护能力进行研究。主要研究内容和成果汇总如下:  1、SMB(实验室规模)和DAC(DAC-100,ID100mm)均能实现竹叶黄酮制剂BLF-d24中四种碳苷黄酮单体的有效分离,样品分离能力分别为:34mg/h及1.25g/h。可以看出,DAC分离制备技术的生产能力较SMB更高;并且DAC制备系统采用乙醇/水为流动相,较之于SMB制备系统(乙腈/水为流动相)具有无毒环保、成本低廉等优点。  2、采用固定化脂肪酶(CALB)对荭草苷与异荭草苷单体进行酶法酰化修饰,分别得到了脂溶性的荭草苷月桂酸酯和异荭草苷月桂酸酯。由于脂肪酸的接入使得酰化产物的体外抗氧化活性(DPPH·及ABTS·+清除)有所降低,然而Rancimat法评价表明,在油脂体系中酯化产物的抗氧化活性显著增强。  3、以人正常皮肤成纤维细胞(GM0639)为研究对象,通过MTT法、自由基检测、DNA损伤防护等细胞辐照实验,对荭草苷月桂酸酯的辐射防护作用进行了探索性研究。12C6+离子束2Gy剂量的辐照GM0639实验表明,荭草苷月桂酸酯对辐射过程中产生的急性损伤效应具有较强的保护作用,而对损伤后的修复作用不明显;自由基检测结果表明,荭草苷月桂酸酯具有良好的自由基清除能力,对自由基造成的细胞损伤具有防护作用;DNA损伤防护试验显示,荭草苷月桂酸酯可有效防护GM0639细胞在不同辐射源(X射线或12C6+离子束)下的辐射损伤,其中,对12C6+离子束辐射的防护效果优于对X射线的防护(DMSO为阳性对照)。  同时,荭草苷月桂酸酯对GM0639无明显细胞毒性,因此竹叶碳苷黄酮酰化产物具有天然辐射防护剂开发潜力。
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