共振光散射技术在生物大分子的痕量测定中的应用研究

来源 :长春师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Arqiu
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上世纪九十年代之前,生物大分子的测定主要采用的荧光法和分光光度法,但各自都存在不足。荧光法受探针类型的限制,无荧光性质的药物无法使用此方法对大分子进行测定,而一些有荧光的药物价格很昂贵甚至是有毒,并不适合被广泛应用于生物化学或医药界;分光光度法灵敏度较低、容易受到干扰,并且很耗时。共振光散射(Resonance Light Scattering,简称RLS)技术以其操作简便、仪器简单、灵敏度高、探针种类丰富以及省时的优点被人们认知,所以越来越多的研究人员把目光转向了用新兴的共振光散射方法定量测定核酸、糖类以及蛋白质等生物大分子。DNA与小分子的结合方式主要有三种:嵌入式、沟槽式和静电引力。表面活性剂可以增强溶液表面活性,敏化共振光散射强度,通过静电引力可以与DNA很好的结合。阳离子表面活性剂早已被作为测定DNA的探针应用,故本文将其运用到共振光散射光谱法的研究中。本文对应用共振光散射技术测定生物大分子的方法进行细致的研究,并建立了四种简便、快速、灵敏的测定鲑鱼精DNA的共振光散射探针,主要内容如下:运用黄酮类中药有效成分(柚皮素/橙皮素/芹菜素)-CTAB探针测定DNA。在三元体系中,CTAB以“桥联”的方式连接了带有负电荷的DNA和解离后的这一种中药有效成分,并且形成体积更大的三元配合物,引起共振光散射明显增强。在实验获得的最佳条件下、在较宽的DNA浓度范围内,中药有效成分-CTAB能够增强DNA的RLS信号,且信号的增强值与DNA浓度成正比。运用建立的共振光散射光谱分析法分析DNA-CTAB-柚皮素体系,DNA在0.017-1.7μg mL1浓度范围内时,353nm处增强的RLS信号与DNA浓度呈良好线性关系。得到线性方程IRLS1.3943.3C(C,μg mL-1)。相关系数r为0.9944,检出限为5.06ng mL-1。合成样品回收率为99.3-105.0%,相对标准偏差RSD为0.54-1.16%。对于DNA-CTAB-橙皮素体系,DNA在0.022-4.4μg mL1浓度范围内时,363nm处增强的RLS信号与DNA浓度呈良好线性关系。得到线性方程IRLS3.11289.025C(C,μg mL-1)。相关系数r为0.9996,检出限为2.34ng mL-1。合成样品回收率为97.3-101.9%,相对标准偏差RSD为0.54-1.16%。对于DNA-CTAB-芹菜素体系,DNA在0.013-4.4μg mL1浓度范围内时,433nm处增强的RLS信号与DNA浓度呈良好线性关系。得到线性方程I1RLS5.6448.086C(C,μg mL-)。相关系数r为0.9975,检出限为2.97ng mL-1。合成样品回收率为101.2-109.5%,相对标准偏差RSD为1.82-4.74%。研究了蒽醌类化合物大黄素在弱酸与弱碱条件下的不同解离方式,并以大黄素-CPB作探针测定DNA。CPB以静电引力作用结合DNA与大黄素,致使RLS信号显著增强。在获得的最佳实验条件下,340nm处增强的共振光散射信号强度IRLS与DNA浓度在0.01-2.72μg mL-1范围内呈现良好线性关系,由此建立一种定量检测DNA的共振光散射分析方法。此方法的线性回归方程为IRLS28.68118.35C(C,μg mL-1),相关系数r为0.9923,检出限(3σ)为1.5ngmL-1。该方法成功用于人工合成样品的的测定。样品回收率为97.6-107.3%,相对标准偏差为3.8-5.2%。
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