microRNA-330-3p预测非小细胞肺癌脑转移发生的机制研究

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目的:筛选非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血中可预测脑转移发生的microRNA,及其在脑转移发生过程中的相关机制研究。  方法:通过Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction(qRT-PCR)检测NSCLC患者外周血中microRNA-325、326、328、330-3p、370及500-3p的表达水平;转染合成的特定microRNA模拟物(mi-330-3p mimics)、模拟物的阴性对照物(miRNA mimics negative control)、合成的针对microRNA的抑制剂(mi-330-3p inhibitor)和抑制剂的阴性对照物(miRNA inhibitor negative control)进入肺腺癌A549细胞系;采用MTT方法检测特定microRNA对A549的增殖能力的影响;通过transwell侵袭实验、划痕实验分别检测对A549细胞侵袭及迁移能力的影响;小管形成实验用以检测对A549血管新生能力的影响;western blot和qRT-PCR检测相关蛋白和基因的表达水平。  结果:micro-325、328、330-3p和500-3p在合并/不合并脑转移患者外周血中表达有差异,P<0.01;但进一步单因素COX回归结果提示,micro-330-3p是NSCLC患者发生BM的危险因素;MTT显示,转染mi-330-3p mimics组的A549细胞存活率较其各组高;transwell侵袭实验、划痕实验及小管形成实验分别显示,转染mi-330-3p mimics组的A549细胞与其余各组相比,侵袭、迁移能力及成管能力皆有增强;相反,转染mi-330-3p inhibitor组的A549细胞与其余各组相比,上述能力皆减弱;qRT-PCR以及western blot结果示,稳定过表达miR-330-3p的A549细胞中VEGF、EGFR和MMP-9表达升高,沉默miR-330-3p的A549细胞中上述基因表达下调。  结论:1.血清中miR-330-3p可能作为筛选非小细胞肺癌脑转移的生物标志;2.miR-330-3p可能促进肺癌细胞生长、增强侵袭迁移能力、促进血管形成,进而促进非小细胞肺癌脑转移;3.miR-330-3p发挥作用的分子机制与VEGF、EGFR和MMP-9的表达水平相关。
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