论文部分内容阅读
目的：观察TNF‐α对TLR2，4在大鼠呼吸机相关性肺损伤的肺泡巨噬细胞中表达的影响。方法：将36只SD大鼠,随机分为对照组（C组，n=18）、TNF‐α体内刺激组（T组，尾静脉注射TNF‐α，n=18）,每组再随机分为3组，每组6只(CA、TA为自主呼吸组；CS、TS为正常潮气量组，VT=7ml/kg；CL、TL为大潮气量组，VT=40ml/kg）。C组气管插管机械通气4h，T组气管插管机械通气4h后按10μg/kg尾静脉注射TNF‐α（2.5μg/ml）。鼠尾静脉注射后自主呼吸30min。HE染色光镜观察各组肺组织的形态学表现，透射电子显微镜观察大鼠巨噬细胞超微结构，ELISA法检测大鼠血清和支气管肺泡灌洗液中TNF‐α、IL‐1β,IL‐6，IL‐10的表达，实时定量PCR检测大鼠肺泡巨噬细胞TLR2，4、NF‐κB、MyD88mRNA的表达,免疫荧光细胞化学技术和WB检测大鼠肺泡巨噬细胞TLR2，4、NF‐κB、MyD88B蛋白的表达。结果：（1）成功制造机械通气肺损伤模型。（2）大潮气量组W/D较自主呼吸亚组和正常潮气量亚组明显升高，有统计学意义（P﹤0.05）。自主呼吸亚组肺组织未见明显充血、水肿，正常潮气量组光镜下仅见少量炎性细胞浸润，肺组织轻度充血、水肿，大潮气量组可见肺泡结构破坏，肺泡壁和肺间质内有大量中性粒细胞浸润和较多红细胞渗出，肺间质明显水肿、增宽、肺泡表面透明膜形成。大潮气量组巨噬细胞伪足明显增多，吞噬体和溶酶体增多，并可见溶酶体排空现象。且T组的病理学表现均较C组明显。（3）与自主呼吸亚组和正常潮气量亚组比较，大潮气量亚组大鼠血清、BALF中TNF‐α,IL‐1β,IL‐6,IL‐10表达均有不同程度的升高，有统计学意义（P﹤0.05），且T组较C组表达也有升高，有统计学意义（P﹤0.05）。（4）大潮气量组TLR2，4、NF‐κB、MyD88mRNA的表达水平较自主呼吸组高，有统计学意义（P﹤0.05），蛋白表达水平也升高，有统计学意义（P﹤0.05），与mRNA表达一致，同时T组较C组表达升高且有统计学意义（P﹤0.05）。（5）NF‐κB、MyD88的表达水平与TLR2，4表达水平呈正相关。结论：TLR2、TLR4均参与巨噬细胞对机械通气和TNF‐α刺激的免疫应答；TLR2、TLR4参与了对MyD88依赖性信号转导通路的激活，调节细胞因子的释放，影响巨噬细胞免疫反应的性质；TNF‐α是机械通气致VILI过程中的关键启动因子。TNF‐α是TLR2，4在呼吸相关性肺损伤肺泡巨噬细胞中表达的调控因子之一。NF‐κB在机械通气致VILI的信号转导过程中起到了枢纽作用。