【摘 要】
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链格孢霉菌侵染苹果使其患霉心病,导致苹果贮藏过程霉变腐烂,造成严重的经济损失。目前用于防治苹果霉心病的措施主要有物理防治法、化学防治法和生物防治法。但物理防治法成
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链格孢霉菌侵染苹果使其患霉心病,导致苹果贮藏过程霉变腐烂,造成严重的经济损失。目前用于防治苹果霉心病的措施主要有物理防治法、化学防治法和生物防治法。但物理防治法成本高,而化学防治存在农药残留的弊端。生物法具有无污染、无农残等优点,是当前果蔬采后防治领域的研究热点。目前生物防治的研究集中在防治材料和方法方面,对于病原菌的抑制机理尚未有深入研究。本文选用银杏源的活性成分,研究其对苹果链格孢霉的抑制机理,以期为链格孢霉所引起果蔬采后病害的生物防治奠定理论基础。银杏活性成分包括银杏外种皮中醇溶性和水溶性活性成分、银杏叶多糖以及银杏内生菌发酵液和脂肽,研究其对苹果链格孢霉的抑制作用。结果如下:(1)采用生长速率法,从实验室前期保藏的银杏内生菌中筛选对苹果链格孢霉具有抑制作用的菌株,结果表明已有的10株银杏内生菌对苹果链格孢霉均有明显的抑制作用,其中菌株Q7的抑制率最高。选择Q7为目标菌株,进行形态学和生理生化特征鉴定,进一步测定16S rRNA序列,最终鉴定菌株Q7属于芽孢杆菌属,命名为B.subtilis Q7。(2)制备银杏活性成分,包括外种皮醇溶性和水溶性提取物、银杏叶多糖、B.subtilis Q7发酵液和脂肽,并考察其对苹果链格孢霉的抑制作用。当银杏外种皮醇溶提取物浓度为120 mg/mL时对链格孢霉的抑制率最高,为18.87%;水溶提取物浓度为120 mg/mL时对苹果链格孢霉的抑制率24.25%,90 mg/mL银杏叶多糖对苹果链格孢的抑制率为39.13%,B.subtilis Q7发酵液稀释至200倍时,对链格孢霉的抑制率为60%左右,脂肽浓度为1.0 mg/mL时对链格孢的抑制率为60.78%。(3)研究B.subtilis Q7发酵液对链格孢霉的抑制作用:B.subtilis Q7发酵液处理组培养液电导率升,高膜脂过氧化程度加剧,菌体细胞膜通透性增加;经B.subtilis Q7发酵液处理后,链格孢霉菌丝体蛋白含量相比对照组降低10.9%;B.subtilis Q7发酵液抑制苹果链格孢霉代谢酶系的酶活,对SOD酶活力的影响相对较小,但对PPO和POD的抑制作用较明显,其酶活力分别为对照组的29.8%和44.9%。考察温度和酸碱度对B.subtilis Q7发酵液抑菌性的影响:当温度低于70℃时,发酵液对链格孢霉的抑制作用较稳定,当处理温度超过70℃时,抑菌降低至33.0%;发酵液在pH 5.0~11.0的条件下对苹果链格孢霉有较强的抑制作用。(4)B.subtilis Q7脂肽对苹果链格孢霉的抑制机理与发酵液相似,加剧膜脂过氧化程度,破坏菌体细胞膜的通透性,培养液电导率增高;经脂肽处理后,苹果链格孢霉菌丝体蛋白含量降低34.3%;链格孢霉代谢酶系的酶活力降低,其中脂肽对POD酶活力的影响较小,对SOD和PPO的抑制作用较大,其酶活力分别是对照组的51.3%和35.5%。脂肽的红外结构分析表明,脂肽含有N-H键、C=O键等亲水基团以及芳烃=C-H键等疏水基团。
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