论文部分内容阅读
H9N2亚型禽流感病毒在全世界范围内均有分布，感染蛋鸡可引起鸡群产蛋量和鸡蛋质量下降，尤其是产蛋高峰期鸡群，鸡群感染后产蛋量下降很快，出现沙壳蛋、软壳蛋和畸形蛋。蛋壳质量的下降直接导致蛋品质的下降。鸡蛋蛋壳质量变差会造成较高的蛋壳破损率，同时蛋壳上的细小裂纹增加了细菌污染的风险，破裂的蛋壳，造成了食品质量和安全性问题，让鸡蛋的生产及销售面临着巨大的风险。目前有关H9N2亚型禽流感病毒感染蛋鸡后蛋壳质量的变化规律还不清楚。蛋壳形成主要在输卵管子宫部，当卵通过输卵管子宫部时，壳体的各层依次组装形成蛋壳。钙结合相关基因CaBP-D28k的表达调节蛋壳中钙的沉积，与蛋壳矿化有密切关系，影响蛋壳质量的好坏。采用H9N2亚型禽流感病毒人工感染30周龄非免疫健康产蛋高峰期蛋鸡，在感染后第1、2、3、5、7天，收集感染鸡所产鸡蛋检测蛋壳质量。采用原子分光光度法检测蛋壳中钙的含量，采用电子扫描显微镜观察鸡蛋蛋壳内外表面及横断面超微结构。另外，每天定时解剖部分感染鸡，无菌采集输卵管。将采集的输卵管按伞部、膨大部、峡部、子宫部和阴道部5个不同部位分别处理，采用Trizol法提取其总RNA，经反转录成cDNA，利用相对荧光定量法检测与蛋壳钙化相关的CaBP-D28k基因表达变化。结果在感染后第1、2、3、5天，蛋壳中钙的相对含量逐渐下降，蛋鸡输卵管子宫部组织中CaBP-D28k表达量有规律下降，感染第5天的表达量非常少，与蛋鸡产软壳蛋有密切关系。扫描电子显微镜观察蛋壳超微结构发现，蛋壳角质层逐渐变粗糙，气孔出现裂痕；横断面变薄，其中乳突层变薄，乳突层与蛋壳内膜纤维层的间隙增多，乳突层的宽度也变小，栅栏层和垂直晶体层的平整性和致密性均不同程度地下降；蛋壳内表面纤维从感染第3天开始间隙变大。感染第7天，蛋壳中钙的相对含量有少量回升，鸡输卵管中CaBP-D28k的表达量开始小幅回升，蛋壳角质层比第5天光滑，横断面各层均增厚，内表面纤维间隙略有变小。