单环刺螠纤溶酶（Urechis unicinctus fibrinolytic enzyme,UFE）是由UFEⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ一系列同工酶组成的纤维蛋白酶,具有良好的抗凝、溶栓活性和生物安全性。然而,由于不同文献中UFE样本的采收时间、提取部位、提取方法的不同,且尚无同工酶间的活性差异研究,导致科研数据差异大,实验结果无法被重复。本课题选取我国海域具有代表性的单环刺螠生物体,旨在研究其体内纤溶酶的季节变化规律,以实现UFE收率的最大化及活性的稳定性。研究单环刺螠不同部位中UFE的含量差异,结果显示:与其它部位相同质量粗提物相比,体腔液粗提物中各UFE含量高于其他部位,UFEⅢ含量为内脏中的1.9倍,为体壁肌中的4.5倍;体腔液粗提物中总蛋白含量最高,各UFE收率也高于其它部位。研究单环刺螠体腔液中UFEⅠ、Ⅱ、Ⅲ的活性差异,结果显示:UFEⅢ体外抗凝、溶栓的作用强度明显优于UFEⅠ、Ⅱ;在小鼠体内,UFEⅢ可显著延长凝血时间;UFEⅢ能有效缓解大鼠动脉栓塞症状,表现出良好的溶栓活性;UFEⅢ能显著延长动物内源性凝血指标PT和TT,能极显著降低各凝血因子活性（p<0.01）,对钙离子的降低作用强于肝素钠组。研究不同季节单环刺螠体腔液中UFEⅠ、Ⅱ、Ⅲ的含量差异,结果显示:秋季批单环刺螠相同质量体腔液中粗提物的收率为夏季批的1.9倍,为春季批的3.7倍;不同季节相同质量粗提物中各UFE含量及收率均呈升高趋势,秋季批UFEⅢ收率达41.2%。研究不同季节单环刺螠体腔液中相同质量粗提物的活性差异,结果显示:春、夏、秋季体腔液中相同质量粗提物的活性增强,证明粗提物中纤溶活性成分含量增加。不同季节粗提物体外抗凝作用提高,生成栓块重量减少;体外溶栓作用增强,加入秋季批粗提物组血栓溶解率可达60.9%;体内延长凝血时间作用增强,加入秋季批粗提物组凝血时间最短;体内溶栓效果提高,加入秋季批粗提物组相对脑梗死体积仅为18.03%。对UFEⅢ的纯化条件进行优化,确定Sephacryl S-100、Q-Sepharose Fast Flow最佳柱高比为1:8,Sephadex G-50最佳柱高比为1:6;最佳流速为2.0 mL·min^-1;Q-Sepharose Fast Flow流动相为0.4 mol·L^-1 NaCl/0.04 mol·L^-1 Tris-HCl。综上,本课题可确定UFE最佳提取部位为单环刺螠体腔液;根据UFE含量的季节积累性,可确定样本采收季节为秋季;UFEⅢ提纯条件优化结果符合预期,这为后续验证UFE后续药效学研究及药物的开发利用提供依据。