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目的:明确本地区临床分离鲍曼不动杆菌的分布特点及对常用抗菌药物的耐药情况;比较替加环素对鲍曼不动杆菌的体外药敏试验不同方法之间的差异;对替加环素耐药鲍曼不动杆菌进行耐药基因的检测及同源性分析。为临床治疗和控制耐替加环素的鲍曼不动杆菌的感染提供科学依据和实验数据。方法:采用琼脂二倍稀释法测定119株鲍曼不动杆菌临床分离株对24种临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC);用微量肉汤稀释法、琼脂二倍稀释法和K-B法三种方法检测鲍曼不动杆菌对替加环素的药敏结果;PCR扩增检测主动外排泵基因ade ABC-ade RS,Real-Time PCR检测外排泵基因ade A、ade B、ade C的表达情况。四环素外排泵基因tet A、tet B,D类碳青霉烯酶OXA-23、OXA-51及I类整合子int I的检测。替加环素耐药菌株的同源性分析。结果:1.119株鲍曼不动杆菌的标本类型以痰液为主(76.5%),分布科室包括呼吸内科(30.3%)、ICU(26.1%)、神经外科(12.6%)等。菌株多分离于高龄(65岁以上)的男性患者。119株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B敏感率100%,替加环素的耐药率在10%左右,多重耐药株(MDR)占76.5%(91/119)。2.用96孔板微量肉汤稀释法、琼脂二倍稀释法和K-B法这三种不同方法检测119株鲍曼不动杆菌对替加环素的体外药敏性。结果参考FDA的判定标准耐药率分别为0.0%、11.7%和4.2%;参考EUCAST的判定标准耐药率分别为0.0%、45.4%、36.2%。3.将119株菌分为多重耐药组MDR(91/119)和敏感组SS(28/119),其中MDR分为替加环素非敏感组TNAB(10/91)和替加环素敏感组TSAB(81/91)。TNAB组的ade ABC-RS的检出率为100%,而TSAB组ade ABC-RS的检出率为76.5%。TNAB组ade A与ade C的相对表达量比TSAB组较高,且差异有统计学意义。而ade B的相对表达量在TNAB组和TSAB组差异没有统计学意义。4.TNAB组D类碳青霉烯酶基因OXA-23的检出率为100%(10/10),OXA-51的检出率也为100%(10/10);整合子I类基因的检出率90%(9/10)。而TSAB组OXA-23的检出率为35.8%(29/81),OXA-51的检出率100%;整合子I类基因的检出率76.5%(62/81)。5.将TNAB进行MLST分型:共9个ST型,其中5个是新发现的。经e BRUST软件计算ST138(1-3-3-2-2-50-3)是Founder最主要的ST型。结论:1、本地区临床分离鲍曼不动杆菌多重耐药率高达76.5%(91/119),耐药情况情况严重。碳青霉烯类作为传统的一线药物,耐药率较高。而替加环素耐药率较低是目前治疗多重耐药鲍曼不动杆菌感染的有效药物。应当实时监测鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。2、替加环素作为临床的新型抗生素,CLSI并未给出标准的药敏检测方法和判定标准。用CLSI推荐的三种方法检测,药敏结果差异较大。应尽快统一标准规范操作,为临床微生物的诊断和用药提供准确依据。3、Ade ABC外排泵系统对介导鲍曼不动杆菌的替加环素耐药有重要的意义。OXA-23、OXA-51和int I广泛分布于耐替加环素的鲍曼不动杆菌中,且OXA-23阳性菌株中替加环素的耐药率明显高于OXA-23阴性菌株(P<0.01),我们认为OXA-23也参与了鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药。4、MLST结果提示:分离出TNAB菌株相关科室应做好手卫生、严格实行感染病人床边隔离制度和无菌操作。控制耐替加环素鲍曼不动杆菌的院内感染及传播。