人hNTKL-BP1基因在HCC中的表达及Rbx1相互作用蛋白的筛选研究

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1.人hNTKL-BPJ1基因在HCC中的表达肝癌是世界最常见的恶性肿瘤之一,本文主要探讨N端激酶结构样蛋白结合蛋白基因(hNTKL-BP1)在人类原发性肝癌及癌旁肝组织中的表达并建立采用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)技术研究hNTKL-BP1表达差异的方法。实时荧光定量PCR技术准确性好、重现性高,可定量分析基因表达水平,本文采用该技术的一种称为2<-△△Ct>方法的计算方法分析比较该基因在人类肝癌组织和癌旁肝组织中的表达差异。 44例原发性肝细胞癌(HCC)组织样品的检测结果显示肝癌组织中hNTKZ-BP1基因表达水平显著高于癌旁肝组织(t=2.69,P<0.01)。结合临床病理资料分析,我们发现在44例肝癌组织与癌旁肝组织hNTKL-BP1基因表达差异和肿瘤大小有一定的相关性(P=0.028),肿瘤越大,hNTKL-BP1基因表达上调越明显。该研究成功建立RFQ-PCR检测hNTKL-BP1mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性,hNTKL-BP1基因可能与肝癌的发生、发展有一定相关性。 2.Rbx1相互作用蛋白筛选研究Rbx1蛋白是泛素连接酶E3复合物——SCF复合物的组成成分,能与cullin-1形成异源二聚体从而催化泛素化进程,在蛋白的泛素化过程中发挥了重要的作用。本研究主要以Rbxl作为酵母双杂交的诱饵,通过酵母双杂交筛选,我们得到了三个能够与Rbx1发生相互作用的已知蛋白:SERTAD1蛋白、OS9蛋白、HAX1蛋白。生物信息学预测HAXl蛋白有PEST结构域,该结构域被认为是死亡结构域,与泛素化相关,普遍认为HAX1蛋白是个抗凋亡蛋白。因此我们对Rbx1与HAX1相互作用进行了进一步研究, Rbx1与HAX1蛋白相互作用的特异性通过酵母体内验证实验、体外GST Pull down实验得到验证。根据Rbx1与HAX1相互作用的研究,对它们的生物学意义进行讨论和思考,我们猜测Rbx1可能通过与HAX1相互作用,影响HAX1的泛素化,从而导致其降解,进而促进细胞凋亡。上述工作对HAX1的生物学功能提供了一定的证据和线索,对于将来深入研究HAX1的泛素化过程的具体原因、对凋亡的影响等问题奠定了良好的基础。
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