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目的：日本血吸虫病(Sehistosomiasis japonicium)是一种严重危害人、畜健康的人兽共患寄生虫病。血吸虫病疫苗的研究可以作为灭螺、药物防治和其他综合防治措施的一项重要补充。本课题利用成功构建好的含有日本血吸虫重组 Tsp2/Sj29表膜蛋白质粒的菌株E.coli BL21/pET32a,诱导表达血吸虫重组 Tsp2/Sj29表膜蛋白,并利用其免疫小鼠,观察SjTsp2/Sj29蛋白疫苗对小鼠的抗病免疫效应。 方法：pET32a/SjTsp2/Sj29重组菌种划痕接种含氨苄LB固体培养基过夜,挑取单菌落,扩大培养,收集细菌,按照SanPrep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒操作说明进行质粒提取。将抽提的重组质粒用限制性内切酶Xho I和BamH I进行双酶切和测序鉴定。鉴定正确的菌种用氨苄LB液体培养基扩大培养、IPTG诱导表达,收集细菌、超声破碎、分离、纯化、变性与复性表达的重组蛋白,SDS-PAGE电泳法鉴定表达和纯化的蛋白,并用BCA法测定重组蛋白的浓度。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为A、B和C组,A和B组各10只,C组9只。A组免疫组即蛋白疫苗组,首次免疫每鼠经背部皮下多点注射用等体积弗氏完全佐剂乳化的50μg SjTsp2/Sj29重组表膜蛋白,首次免疫12、24天后,分别在每鼠背部皮下再次多点注射用等体积弗氏不完全佐剂乳化的50μg该重组蛋白。B组对照蛋白组(硫氧还蛋白),即用pET32a空质粒表达并纯化的伴侣蛋白代替疫苗蛋白,免疫方法同 A组。C组为空白对照组,用生理盐水代替蛋白。末次免疫后第10天,每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。于感染45天后剖杀全部实验小鼠,眼眶取血,分离血清,间接性ELISA法检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3抗体亚型和IgM抗体;同时检测血清中细胞因子IFN-γ、IL-4水平;收集虫体并计数;摘取肝脏,称重、消化,于显微镜下计虫卵数,分别计算减虫率和减卵率;将小鼠部分肝组织做成切片进行HE染色,观察虫卵肉芽肿损害状态。 结果：pET32a/SjTsp2/Sj29菌经IPTG诱导可大量表达,经变性、复性获得纯化的日本血吸虫Tsp2/Sj29重组表膜蛋白。免疫组与空白对照组比较,减虫率和减卵率分别为23.95％、55.57%(P<0.05),差异有统计学意义,硫氧还蛋白组与空白对照组之间比较,减虫率和减卵率差异均无统计学意义(P>0.05);免疫组小鼠肝组织肉眼观察色泽略带暗红色,质软,表面较光滑,隐约可见少量灰白色小点,虫卵结节较少,较空白对照组形态学改变明显减轻;组织切片中免疫组小鼠肝细胞混浊肿胀,虫卵肉芽肿周围炎症反应轻,细胞浸润不明显,肉芽肿面积较小,与对照组比较,损害程度明显减轻。免疫组鼠血清中IgG1、IgG2a和IgG2b显著高于空白对照组(P<0.05),IgG3和IgM较空白对照组没有明显区别;免疫组鼠血清IFN-γ、IL-4细胞因子水平高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01); 结论：SjTsp2/Sj29重组表膜蛋白疫苗有一定的免疫保护效果;该重组蛋白免疫诱导了 Th1/Th2混合型免疫反应。