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目的： 建立血小板同种抗原（HPA1-28w）系统测序分型技术(PCR-SBT)基因诊断方法，并建立无偿献血者血小板HPA、HLA-A、B基因数据库，评估HPA1-28w系统错配的概率。利用建立的血小板基因型数据库，为血小板输注无效患者选择基因“数字化”配合的供者，为有效解决血小板输注无效提供一种可行的方法，进一步提高临床输血安全。 方法： 1.采用商用基因组DNA抽提试剂盒，利用自动抽提设备对样本基因组DNA进行抽提。样本来自随机的1060例单采血小板献血者，征其知情同意后采集全血标本。 2.从欧洲免疫多态性数据库(the Immuno Polymorphism Database，IPD：www.ebi.ac.uk/ipd/hpa)中下载HPA1-28w所在基因的核酸序列信息及各HPA相关的核苷酸多态性位点，利用Primer3.0(v.0.4.0)软件设计引物，优化PCR参数，实现同一扩增条件下扩增HPA1-28w系统。然后采用商用试剂（ABI Bigdye3.1）参照试剂说明进行测序反应，利用ABI SeqScape V2.5软件进行HPA序列比对分析。 3.采用商用试剂进行HLA-A,B位点基因分型，参照试剂说明进行操作。采用Assign3.5 SBT分析软件确定标本HLA等位基因，HLA-A,B位点等位基因频率采用直接计数法计算，单体型频率及 Hardy–Weinberg遗传平衡检验均采用Arlequin软件分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。 4.采用单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验（MAIPA）方法检测PTR患者HPA抗体和HLA抗体。按照交叉反应组（CREGs）配合技术在血小板供者数据库选择供者，配型分级按照美国AABB血小板HLA配型分级标准。 5.HPA等位基因频率采用直接计数法计算，Hardy–Weinberg遗传平衡检验采用SPSS13.0软件，P＜0.05表示差异具有统计学意义。HPA抗原不配合概率的计算公式为a抗原不配合概率=b2(1-b2)，b抗原不配合概率=a2(1-a2)；HPA抗原随机输注不配合概率=a2(1-a2)+b2(1-b2)。 结果： 1.建立了HPA1-28w系统的PCR-SBT基因分型方法，所有HPA系统在同一条件下实现多重PCR扩增。多重PCR扩增后每组均能得到明显的三个条带，且三个条带均呈现一定的强度，扩增产物片段长度在272bp到695bp之间，与预期大小一致。除HPA-5系统反向引物测序时会出现多态性位点后续碱基峰杂乱外，其他HPA抗原系统正反两向引物测序均得到明显清楚的结果。检测国际输血协会血小板免疫学Workshop的10份考核样本，分型结果与提供的参考结果完全一致。 2.在检测的1060例样本中，HPA-1、2、3、4、5、6w、15、21w系统存在多态性，其他HPA系统只检测出HPA-aa基因型。其中HPA-1系统a频率为0.9948，b频率为0.0052；HPA-2系统a频率为0.9410，b频率为0.0590；HPA-3系统a频率为0.5316，b频率为0.4684；HPA-4系统a频率为0.9981，b频率为0.0019；HPA-5系统a频率为0.9882，b频率为0.0118；HPA-6w系统a频率为0.9835，b频率为0.0165；HPA-15系统a频率为0.5330，b频率为0.4670；HPA-21w系统a频率为0.9915，b频率为0.0085。 3.HPA-1、2、3、4、5、6w、15、21w系统错配的概率分别为0.01027，0.10481，0.37400，0.00376，0.02304，0.03195，0.37391，0.01670。在不考虑ABO血型的情况，理论上出现一个HPA-1系统bb纯合子，需要37144例供者。出现一个HPA-4系统bb纯合子，需要280900例供者。出现一个HPA-5系统bb纯合子，需要7191例供者。出现一个HPA-6w系统bb纯合子，需要3669例供者。出现一个HPA-21w系统bb纯合子，需要13872例供者。 4.分析显示1060例样本中HLA-A,B位点分布符合Hardy-Weinberg平衡分析。HLA-A观察杂合度为0.87736，预期杂合度为0.88486，P值为0.14095；HLA-B观察杂合度为0.93774，预期杂合度为0.94668，P值为0.22917。HLA-A等位基因频率最高为A*11:01，大于1％的等位基因有A*24:02、A*02:01、A*02:07、A*33:03、A*26:01、A*02:03、A*02:06、A*03:01、A*11:02、A*31:01、A*30:01、A*01:01，累计频率达到95.85%。HLA-B等位基因频率最高为B*46:01，大于1%的等位基因有B*40:01、B*58:01、B*07:02、B*13:01、B*13:02、B*15:01、B*15:02、B*15:11、B*39:01、B*40:02、B*40:06、B*15:18、B*48:01、B*44:03、B*51:01、B*27:04、B*35:01、B*37:01、B*38:02、B*55:02、B*54:01、B*52:01、B*15:27，累计频率达到89.48%。 5.按照HLA抗原交叉反应组进行分类：1C组为38.0660%；2C组为57.1699%；4C组为53.2075%；5C组为40.4719%；6C为49.9527%；7C为41.5565%；8C组为7.4527%；10C组为13.5378%；12C组为30.1414%。按照B1X配合度，估算患者（8C组患者）至少搜寻到1个B1X配合级供者时，理论上需要32414个供者。 6.用MAIPA方法分析32例血小板输注无效标本，其中26例检测出HLA抗体，1例同时检出HLA抗体和抗HPA-15抗体。对9例申请数据库搜寻血小板供者的PTR患者利用基因“数字化”数据配合技术进行血小板供者筛选，其中4例筛选到A级匹配供者、2例筛选到B1U级供者、2例筛选到B1X级供者，筛选的血小板输注后临床症状改善明显，止血效果良好。 结论： 1.建立了同一扩增体系条件下血小板同种抗原系统HPA1-28w基因测序诊断技术，方法准确有效。 2.建立了1060例浙江汉族已知基因型的血小板供者数据库。 3.发现人群中HPA-1、2、3、4、5、6w、15、21w系统存在多态性，其他系统呈现单一型，首次获取了人群HPA22w-28w等位基因频率,评估了HPA1-28w系统随机输注时抗原错配的概率。 4.获取了浙江汉族人群HLA-A、HLA-B等位基因频率及单体型分布情况。 5.进行了血小板基因“数字化”数据配合，交叉反应组配合程度在A级和B级的患者在输注后效果良好，为解决免疫性血小板输注无效提供了一种可行的方法。