目的：　　 构建弓形虫RH株p3×Flag-CMW-14-TgHSP70真核表达重组质粒。观察不同剂量的重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70皮下肌肉注射免疫BALB/c小鼠诱导的细胞免疫应答动态变化。　　 方法：　　 第一部分：设计合成TgHSP70引物，PCR扩增其基因片段，获得弓形虫速殖子热休克蛋白(TgHSP70)基因编码片段，双酶切后与真核表达质粒p3×Flag-CMW-14连接，连接产物经酶切、PCR及测序鉴定。脂质体法将重组体转染HEK293T细胞中，TgHSP70的表达产物通过RT-PCR和Western blot在基因和蛋白两个水平进行鉴定。　　 第二部分：125只BALB/c小鼠随机均分5组，分别用50μg、100μg、150μg重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70/只皮下肌肉注射免疫小鼠3次，各间隔2周，空白对照组注射100μl Elution缓冲液，空质粒组注射50μg p3×Flag-CMW-14，重组质粒和空质粒分别溶于100μl Elution缓冲液中。分别于首免后第2、4、6、8、10周摘眼球采血，分离血清，每组5只，ELISA法测定血清中IL-2、IFN-γ水平。颈椎脱臼处死小鼠，无菌取脾，分离脾淋巴细胞并计数；再加入终浓度为5μg/ml的ConA，5％CO2、37℃培养24h、72h，取培养上清。ELISA法测定培养24h上清液中IL-4、IL-2水平和培养72h上清液中IFN-γ水平。　　 结果：　　 PCR扩增获得约495 bp的HSP70编码基因片段，p3×Flag-CMW-14-TgHSP70重组体构建成功，阳性克隆经双酶切、PCR及测序鉴定，基因片段序列完全正确。将 p3×Flag-CMW-14-TgHSP70真核表达重组质粒转染到HEK293T细胞中，经RT-PCR检测可见预期大小的目的基因条带，Western-blot检测表达产物大小约19 kDa。　　 50μg、100μg、150μg重组质粒组小鼠血清IL-2水平在免疫后第6周明显上升，第8周达到顶峰，第10周稍有回落。50μg、100μg、150μg重组质粒组和对照组的血清IFN-γ水平随时间改变基本一致，无明显差异。免疫后第10周，50μg重组质粒组脾细胞数（17.362x106个/ml）显著高于150μg组（15.22x106个/ml）、lOOμg组（15.66x106个/ml）、空质粒组（14.82x106个/ml）和空白对照组（16.076x106个/ml）（F=4.478，P<0.05）。免疫后第2～10周150μg组脾淋巴细胞IL-4水平均高于50μg和100μg组，但差异无统计学意义。免疫后第2～10周，50μg、100μg、150μg重组质粒组和空质粒组脾细胞IL-2水平均高于对照组，差异显著（F=5.319，P<0.05），150μg重组质粒组显著高于其他各组。免疫后第2～10周，150μg重组质粒组脾细胞IFN-γ水平显著高于其它各组（F=3.918，P<0.05），并在第8周（A405=0.9867）时达到最高值。　　 结论：　　 成功构建了真核表达重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70。不同剂量重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70免疫小鼠均可诱导一定的细胞免疫应答，150μg重组质粒组诱导的脾淋巴细胞IL-2和IFN-γ水平优于50μg、100μg重组质粒组，50μg、100μg、150μg重组质粒组在免疫后第8周诱导细胞免疫应答达到高峰。该重组质粒表达的抗原分子TgHSP70具免疫原性，可作为疫苗候选抗原深入研究。