抗菌肽是指具有抗菌活性的小分子多肽,是生物体天然免疫防御系统中不可或缺的一部分。蚯蚓生活在恶劣环境中,经过长时间的进化,能够产生多种抗菌成分,形成自己独特的防御外来微生物入侵的机制。本研究根据与抗菌肽EAP-1蛋白质序列相似性极高的LumbricinⅠ(6-34)的序列,人工合成了29肽。采用菌落计数法对该29肽的抗菌谱、作用时间、最低抑制浓度,以及耐热性进行了研究。实验结果证明29肽具有以下特性：1)广谱性,即不仅能有效抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球等常见细菌,而且还能够抑制酿酒酵母、露湿漆斑菌、总状毛霉等真菌；2)活力高,当浓度为0.009mg/mL时对大肠杆菌就有明显抑制效果；3)稳定性强,在pH为2.2或11的环境中抑菌活性不变,而且在煮沸10分钟后仍能保留80%以上的活性。根据大肠杆菌密码子偏好性,设计了29肽单链编码DNA,通过两步PCR得到双链DNA基因,并获得pMD19-T-29aa克隆载体。测序证明,克隆的序列与原设计一致。在此基础上构建了融合表达载体pGEX-4T-2-29aa和非融合表达载体pBV221-29aa,并进行了转化、诱导和表达。SDS-PAGE结果表明,两个载体分别表达了融合的GST-29肽和游离的29肽产物。尽管融合蛋白GST-29肽表达明显,并以可溶性的状态存在,但经凝血酶作用去掉GST标签后的游离29肽没检测到具有抑菌活性,推测可能由于切点处多了两个氨基酸影响到29肽的活性结构。非融合载体表达的游离29肽产物以包涵体形式存在,虽然表达量不高,但是复性后表现出抑菌活性。