CD81分子,即抗增生抗体识别的靶抗原(Target of the Antiproliferative Antibody-1, TAPA-1),从其结构上来看属于四跨膜区蛋白( tetraspanin )超家族成员,含有4个跨膜转膜区和2个胞外区,在除红细胞、血小板和神经元以外的其它细胞中表达,可影响细胞的粘附、激活、增殖和分化,有改变细胞形态、抑制合胞体形成、参与信号传导等生物学功能。星形胶质细胞是具有增殖能力的细胞,许多细胞因子和生长因子参与了星形胶质细胞增殖与分化的调节。有文献报道:在不同分化状态的星形胶质细胞中CD81的表达也不同。本室的研究也发现体外培养的星形胶质细胞在未汇合时CD81的表达较低,随着星形胶质细胞密度的不断增加至细胞汇合时,CD81的表达也逐渐增强。这表明CD81影响了星形胶质细胞的增殖,但究竟有何影响尚不清楚。本课题的第一部分对星形胶质细胞进行了培养,通过绘制星形胶质细胞的生长曲线和增殖指数曲线,探讨了体外培养的星形胶质细胞的生长特性,为深入研究星形胶质细胞的功能奠定了基础。本课题的第二部分通过在体外培养的星形胶质细胞中加入外源性抗CD81抗体,观察星形胶质细胞的增殖情况和细胞周期的进程,探讨了CD81在星形胶质细胞增殖中的作用。第一部分,我们在一段较长的时间范围内观察星形胶质细胞的生长情况,研究了纯化培养的星形胶质细胞的体外生长特性。我们将纯化的星形胶质细胞分为6h、12h、18h、24h、30h、36h、42h、48h、54h、60h、72h、84h、96h、120h 14个时间组,培养不同的时间后,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线观察细胞的生长状况,用流式细胞仪检测细胞周期各时相的变化并绘制增殖指数曲线,所得数据用SPSS软件进行统计学分析。结果:①星形胶质细胞的生长曲线可明显的分为三个阶段:第一阶段为0至24h,在此时间内生长曲线平缓上升,其斜率为0.64。第二阶段为24h至84h,在此时间内生长曲线急剧上升,其斜率为2.69;此阶段中24h至48h时曲线最陡,斜率为3.94,细胞呈指数生长。第三阶段为84h至120h,在此时间内生长曲线走势平直,其斜率为-0.005。②星形胶质细胞的增殖指数在第一个细胞增殖周期内可以反映细胞的增殖状态,第一个细胞周期结束后,细胞的数量继续上升增殖指数却降低了。以上结果表明:培养的星形胶质细胞的生长过程分为潜伏期、指数生长期和停滞期三个阶段,其潜伏期为0至24h,指数生长期为24h至48h,停滞期为84h以后。单纯用增殖指数等类似的指标作为细胞增殖状态的判断标准是有一定局限性的,一定要将这些指标与细胞数量结合起来分析。第二部分,我们在培养的星形胶质细胞加入抗CD81抗体,研究了抗CD81抗体在星形胶质细胞增殖中的作用。方法:将纯化的星形胶质细胞分为六组,加入不同浓度的抗CD81抗体,其浓度依次为0μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml,以MTT比色法检测细胞活性。在此检测结果的基础上,选出三个有意义的浓度(0μg/ml、0.5μg/ml、5μg/ml)。加入以上浓度的抗CD81抗体,采用流式细胞术观察星形胶质细胞细胞周期的改变,所得数据进行统计学分析。结果:MTT的结果显示加入抗CD81抗体后星形胶质细胞的数量明显减少,并呈一定的剂量依赖性。流式细胞仪检测结果显示加入抗CD81抗体培养24小时后,实验组的星形胶质细胞处于G0/G1期的细胞指数减少、S期细胞指数增多。MTT和流式细胞仪检测结果表明:抗CD81抗体抑制了星形胶质细胞的增殖,使星形胶质细胞的细胞周期受阻,细胞阻滞于S期。结论:(一)、体外培养的星形胶质细胞的生长过程可分为潜伏期、指数生长期和停滞期三个阶段。其潜伏期为0至24h,指数生长期为24h至48h,停滞期为84h以后。细胞增殖的停滞与接触抑制有关。(二)、单纯用增殖指数等类似的指标作为细胞增殖状态的判断标准是有一定局限性的,一定要将这些指标与细胞数量结合起来分析。(三)、抗CD81抗体抑制了星形胶质细胞的增殖,使星形胶质细胞的细胞周期受阻,细胞阻滞于S期。