烧伤脓毒症是重症烧伤常见而严重的并发症之一,其来势凶猛,病程进展快,常并发MODS,若得不到及时有效的防治,病死率较高。负氮平衡是烧伤脓毒症的代谢特征,是影响病情转归的重要因素之一。随着上世纪八十年代初细胞内选择性蛋白降解信号途径—泛素-蛋白酶体途径的发现,人们对脓毒症时负氮平衡展开了广泛而深入的探讨,研究认为约占人体细胞总干重40%强的骨骼肌蛋白降解增强是机体负氮平衡的主要原因,但目前烧伤脓毒症时骨骼肌蛋白高分解代谢尚缺乏有效的防治措施。 研究目的 烧伤脓毒症时骨骼肌蛋白降解具有“自噬性”特点,单纯通过补充蛋白质或氨基酸并不能有效抑制骨骼肌蛋白高降解。胰岛素是体内主要的合成激素,是肌氮平衡的重要调节者。烧伤脓毒症时糖皮质激素和炎性介质分泌增多等因素可导致胰岛素的生物效应降低,但烧伤脓毒症时胰岛素低抗与骨骼肌蛋白高降解之间的关系及其机制尚有待阐明。本课题试图通过随机、对照、前瞻性研究,经在体动物模型和离体细胞培养,分析胰岛素强化治疗对烧伤脓毒症骨骼肌蛋白高分解代谢的影响及其作用机制,以期为建立有效的临床防治措施提供理论依据。 材料和方法 1 动物实验 (1) 30只雄性大耳白兔随机分为烫伤组、烫伤治疗组、烫伤脓毒症组、烫伤脓毒症治疗组以及对照组。烫伤组使用沸水致兔背部皮肤Ⅲ度烫伤,烫伤面积约占体表总面积(TBSA)的30%;烫伤后立即腹腔注射内毒素2mg/kg·bw模拟烫伤后脓毒症模型。颈静脉置管监测血糖,烫伤治疗组和烫伤脓毒症治疗组均以静脉泵入胰岛素控制血糖在4.4～6.1mmol/L之间。伤后12小时,麻醉并处死动物,留取血、尿及肌肉组织标本。 (2) 测定血浆内皮质醇、肿瘤坏死因子(TNF-a)、乳酸以及胰岛素浓度。 (3) 测定骨骼肌内三甲基组氨酸(3-MH)含量以及尿3-MH排出量。 (4) 测定骨骼肌组织泛素系统相关成分基因转录和蛋白表达水平。 2 细胞培养实验 (1) 建立稳定的兔骨骼肌细胞离体培养增殖、融合方法,使用L[3,5-~3H]-酪氨酸标记肌管蛋白合成。