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第一章Sj童虫细胞型与非细胞型免疫原诱生的保护性差异【目的】前期在小鼠模型中研究证明日本血吸虫(Sj)童虫活细胞可诱生抗攻击感染免疫力。本研究为证明其保护性效果是否与免疫原物理性状有关,比较童虫细胞型和非细胞型免疫原所诱生的保护性差异。【方法】用家兔经Sj尾蚴感染后第18d获得童虫,剪切法制备童虫细胞,细胞超声冻融制备非细胞抗原。动物实验:取50只单性清洁级昆明鼠随机分成对照(PBS)组、童虫细胞型抗原(SCA)免疫组和童虫细胞非细胞型抗原(SNCA)免疫组、童虫碎片抗原(SWFA)免疫组和童虫可溶性抗原(SWSA)免疫组。经小鼠腹股沟皮下肌肉接种免疫原3次,每次间隔2周。末次接种后第4周作攻击感染(30±1尾/鼠),感染后第45d观察虫荷、肝卵荷、肝虫卵肉芽肿大小。此外,用ELISA检测实验鼠血清中特异性抗体动态变化。【结果】PCR鉴定所用童虫细胞无兔源性成分。保护性指标比较显示:SCA组、SNCA组、SWFA组和SWSA组的减虫率分别为46.8%、35.3%、31.4%和8.0%;减卵率分别为:56.2%、38.2%、30.6%和20.2%;SWSA组未见明显减卵效果(P＞0.05)。SCA组小鼠肝虫卵肉芽肿显著小于其他4组(P＜0.05)。免疫学指标检测显示:SCA组、SNCA组、SWFA组和SWSA组各鼠血清中均可检测到抗Sj童虫抗体,其滴度与免疫次数呈正相关,在各组间差别不显著(P＞0.05)。【结论】进一步证明Sj童虫细胞型免疫原可诱导小鼠产生较理想的保护性效果,其诱生机制之一,与免疫原物理性状有关。第二章Sj童虫细胞型与非细胞型免疫原在小鼠注射部位的动态变化【目的】为证明Sj童虫细胞型免疫原诱生的保护性机制是否与免疫原在宿主体内缓慢释放有关,并观察细胞型抗原引起的病理学变化。【方法】昆明鼠设A,B两组:A组经大腿皮下肌肉注射10~7童虫细胞型抗原;B组注射非细胞抗原,注后分别在24hrs、3d、6d、9d和12d每组各处理1只小鼠,从注射部位定量获取组织,用Westernblot法和免疫组化鉴定比较两种类型抗原消失时间的动态差异;用组织病理学观察炎症变化动态。【结果】SDS-PAGE结果显示A、B两组各组织抗原泳道间的区带谱未见明显差异,Western-blot结果揭示,A组小鼠组织在细胞型抗原注射后12d仍可检测到血吸虫抗原持续存在75kDa蛋白条带,而B组非细胞型抗原在注后第3d消失。免疫组化检测抗原的结果与Western blot结果相符。A、B两组小鼠免疫部位的组织病理学观察显示,在注抗原后第1d未见炎性病变,从第3天开始肌肉间隙内出现大量炎性细胞浸润,其中A组小鼠的炎性病变持续至抗原注射后12d,但B组消失于抗原注后第12d已基本见不到炎性细胞浸润,A、B两组的炎性细胞均以中性粒细胞和淋巴细胞浸润为主。两组鼠的抗原注射部位肌细胞均未见异常病变。【结论】血吸虫童虫细胞型免疫原较其非细胞抗原在接种部位可维持更长时间,具抗原缓释作用,但引起炎症病变也较明显,推测细胞免疫原的这一特性可能是诱生高保护性免疫的重要机制之一。第三章Sj童虫细胞与免疫调节剂联用的保护性效果观察【目的】观察免疫调节剂可否进一步提高Sj童虫细胞诱生的免疫保护性效果。【方法】制备感染后第18d童虫细胞。PCR扩增鉴定血吸虫虫源性细胞的种属特异性并检测细胞有无宿主成分污染。实验动物分为8组。A组为PBS对照组;B组为童虫细胞免疫组;C组为IL-2注射组;D组为IL-2+童虫细胞免疫组;E组为IFN-γ注射组;F组为IFN-γ+童虫细胞免疫组;G组为香菇多糖注射组;F组为香菇多糖+童虫细胞免疫组。免疫调节剂每天注射一次,连续5d,免疫部位均为双侧腹股沟皮下肌肉注射,间隔2w 1次,共3次。于末次免疫后第4w采取单盲法对各组小鼠进行攻击感染(30尾/鼠)。感染后第35d剖鼠冲虫观察结果。保护性效果观察指标包括:计数虫荷及肝卵荷;免疫学观察指标包括:ELISA检测免疫前后不同时点鼠血清中特异性抗体的动态变化。【结果】经PCR鉴定证明血吸虫细胞免疫原无宿主成分污染。保护性效果显示:与A组比较,B组减虫率为38.4%,减雌率42.1%;C组、D组、E组、F组和G组和H组的减虫率分别为13.5%、36.1%和32.7%、46.2%、18.3%和33.7%;减雌率分别为-2.1%、21.1%、38.9%、40%、30.5%和40%。B组、C组、D组、E组、F组、G组和H组的LEPG减少率分别为59.8%、26.6%、52.1%、47.7%、57.7%、34%和53.7%;EPF减少率分别为48.6%、25.2%、44.4%、34.7%、50%、28.5%和42.3%。免疫调节剂与细胞联合免疫组与单用细胞组比,特异性抗体水平差异无统计学意义。【结论】免疫增强剂均未能显著提高童虫细胞诱生的免疫保护性效果,但单独注射IFN-γ有一定的抗日本血吸虫免疫保护性效果。