滋补脾阴方药抗老年性痴呆作用有效部位筛选

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目的:滋补脾阴方药(Zibu Piyin Recipe, ZBPYR)是战丽彬教授以清代·吴澄《不居集》的资成汤为基础结合多年临床经验化裁而成,在临床运用中发现滋补脾阴方药能够有效改善老年性痴呆患者的记忆能力和智能状况;在既往实验研究中证实滋补脾阴方药具有改善实验动物学习记忆能力及显著的神经保护作用。本实验以抗老年性痴呆作用为指标,观察滋补脾阴方药不同提取部位对老年性痴呆小鼠动物模型的影响,从而获得滋补脾阴方药抗老年性痴呆的有效部位,并对滋补脾阴方药多糖含量进行测定。方法:1.滋补脾阴方药不同部位的提取:采用回流提取方法对滋补脾阴方药进行提取,用旋转真空泵对药液进行浓缩,然后用D101大孔树脂吸附分离及醇沉法制备滋补脾阴方药不同部位。2.老年性痴呆小鼠模型的建立:采用腹腔注射氢溴酸东莨菪碱(2mg/kg)的方法制备老年性痴呆小鼠模型,通过避暗实验,跳台实验和水迷宫实验,观察滋补脾阴方药不同部位对氢溴酸东莨菪碱模型小鼠学习记忆的影响,筛选获得滋补脾阴方药抗老年性痴呆的有效部位。3.实验动物分组与给药:采用昆明种小鼠,雄性,初始体重20±2g,适应性喂养3天后,采用随机数字表法将小鼠分为9个组:空白对照组、模型组、水煎剂组、水提醇提组、醇沉物组、上清物组、40%乙醇洗脱物组、75%乙醇洗脱物组、95%乙醇洗脱物组,每组7只。各组分别相应给予水煎剂、水提醇提剂、醇沉物、上清物、40%乙醇洗脱物、75%乙醇洗脱物、95%乙醇洗脱物,给药量0.4637g生药材/10g,空白对照组和模型组给予等体积生理盐水,每天1次,连续15天。4.滋补脾阴方药多糖含量的测定:采用蒽酮-硫酸法测定滋补脾阴方药多糖含量。结果:1.模型评价:与空白对照组相比,模型组小鼠在避暗实验及跳台实验的第二天潜伏期缩短(P<0.01),错误次数增多(P<0.01);在水迷宫定位航行实验中平均潜伏期及游泳路程延长(P<0.01),空间探索实验中第一次到达原平台时间明显延长(P<0.01),在原平台位置的穿梭次数显著减少(P<0.01)。2.药效评价:与模型组小鼠比较,醇沉物组和95%酒精洗脱物组小鼠在避暗实验及跳台实验中潜伏期延长(P<0.01),错误次数减少(P<0.01);在水迷宫定位航行实验中平均潜伏期及游泳路程缩短(P<0.05),空间探索实验中第一次到达原平台时间明显缩短(P<0.05),在原平台位置的穿梭次数显著增多(P<0.05)。醇沉物组和95%乙醇洗脱物组分别与水煎剂组、水提醇提组两两比较无显著差异。3.多糖含量测定:测定波长为620nm,蒽酮-硫酸显色,回归线性方程为y=1.566x+0.0654R~2=0.9948,滋补脾阴方药多糖含量为3.11%,精密度RSD=0.4%,重现性RSD=1.7%,加样回收率RSD=1.81%。结论:1.用腹腔注射氢溴酸东莨菪碱的方法建立老年性痴呆小鼠模型,经过行为学实验检测证实小鼠出现学习记忆障碍。2.在分离滋补脾阴方药获得的5个部位中,醇沉物、95%乙醇洗脱物明显改善了氢溴酸东莨菪碱导致的小鼠学习记忆损伤,其作用效果与原方相似,而其余3个部位对小鼠记忆损伤的改善作用不明显。醇沉物、95%乙醇洗脱物可能是滋补脾阴方药抗老年性痴呆作用的有效部位。3.滋补脾阴方药含糖量高,以葡萄糖为对照品,蒽酮-硫酸法测定,方法简便易行,精密度高,重现性好。
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