论文部分内容阅读
研究目的:明确PTPRD基因(protein tyrosine phosphatase, receptor type, Delta, PTPRD)D9S168微卫星位点多态性、mRNA及蛋白表达水平的变化、单核甘酸多态性与肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)发生发展的关系,找到一个或几个能筛查肾癌高危人群、早期预测肾癌不良预后的分子生物学标志物,为肾癌的早期预防和疾病控制提供实际支持。研究方法:采用STR(short tandem repeat)分型法检测93例ccRCC患者PTPRD 5’UTR区域内D9S168微卫星位点的突变情况,采用半定量RT—PCR法和荧光实时定量PCR检测其中32例ccRCC患者的mRNA水平,对其中65例进行免疫组化分析;用RFLP-PCR(Polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism)和DNA测序法检测285例ccRCC病人和570例健康对照的PTPRD基因中Rs2279776、Rs34704234、Rs3215089、Rs2133788、Rs12351899和Rs73398255位点的基因多态性;数据录入和分析采用SPSS16.0统计软件,应用单因素X~2检验,log-rank检验,Kaplan-Meier曲线和Cox回归模型分析年龄,性别,PTPRD的微卫星和SNP位点情况与ccRCC发生发展的联系。结果:1、D9S168位点的突变情况多发生在TNM分期高的病例中53.8%(14/26),在平均随访时间为31.7个月的78例病人中,D9S168突变组(D9S168位点出现MSI或者LOH情况)的病人明显预后不良(P<0.001)。Cox回归分析表明:D9S168位点的突变是ccRCC患者死亡的独立危险因素HR (95% CI)17.901 (2.071– 154.725) (P=0.009)。2、按照病理类型分组,肿瘤组织和相应的癌旁组织组间PTPRD转录水平和蛋白表达水平存在显著差异(P<0.05);癌组织中PTPRD mRNA转录水平低,癌旁组织中PTPRD mRNA转录水平高;癌组织中PTPRD蛋白表达水平低,癌旁组织中PTPRD蛋白表达水平高;癌组织PTPRD蛋白低表达或不表达,PTPRD主要表达在肾近曲小管上皮细胞的细胞膜和部分胞质中。3、各多态性位点在病例组和对照组人群中的分布,以及其与ccRCC病人易感性之间的关系Rs2279776位点[C/G]CC纯合子、CG杂合子、GG纯合子在病例组中的频率依次为14.0%(40/285)、43.5%(124/285)、42.5%(121/285),在健康对照组中的频率依次为15.3%(87/570)、49.8%(284/570)、34.9%(199/570),以GG与CG+CC相比较,病例组和对照组基因型分布p值为0.032(P<0.05),OR值和95%CI为1.376(1.028-1.841) ;Rs34704234、Rs3215098、Rs2133788、Rs12351899和Rs73398255在本次实验中没有发现多态性。结论:1、D9S168位点突变是ccRCC患者不良预后的独立危险因素,能预测ccRCC患者的不良预后。2、D9S168位点突变和PTPRD基因下调有关。3、PTPRD主要表达在生发ccRCC的近曲小管上皮细胞,肾小球不表达。4、PTPRD可能是ccRCC的一个抑癌基因。5、位于PTPRD第一个酶催化区域第27号外显子的rs2279776 (C4396G)的多态性和ccRCC的易感性相关,GG纯合子为致病因素。6、Rs34704234、Rs3215098、Rs2133788、Rs12351899和Rs73398255可能在中国人群中为单一基因型。