神经母细胞瘤是最常见的儿童恶性肿瘤之一，同时也是治疗最困难的肿瘤之一。作为一种胚源性肿瘤，神经母细胞瘤起源于神经嵴。部分神经母细胞瘤可以自行退化，使用诱导剂也可以促进神经母细胞瘤分化。神经母细胞瘤细胞系是神经元发育的良好模型，通过应用蛋白质组学分析技术研究这种模型，可以深入了解神经元分化过程的分子机理，并为肿瘤的临床治疗提供分子靶标。 维甲酸是一种强分化诱导剂，具有控制细胞分化、增殖和凋亡的能力，它可以诱导神经母细胞瘤分化，使其发生逆转。现在普遍认为，维甲酸的这种作用是由于它可以改变细胞的基因表达。已有很多研究关注特定基因产物在神经元分化中的作用，从中已经知道神经元分化过程中发生了很多生化事件。微阵列技术可以相对快速地同时分析比较几千个基因，但具体基因的转录活性与所编码蛋白的表达水平并不总是一致。酵母细胞的大规模研究表明mRNA和蛋白质丰度之间的相关性只有约0.4。 用蛋白质组学方法研究维甲酸诱导神经母细胞瘤分化过程中蛋白表达的整体变化，对于全面揭示该过程的分子事件以及肿瘤的生物学行为具有重要意义。我们选用人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y，用全反式维甲酸处理SH-SY5Y细胞以诱导其分化，同时用未经全反式维甲酸处理的细胞作为对照。制备细胞总蛋白进行双向电泳，用考染和银染方法进行染色。使用ImageScaner获取凝胶图像，然后用ImageMaster 2D Elite软件分析，发现了73个差异表达的蛋白点，其中诱导分化后表达降低的51个，分化后表达增加的22个。从凝胶上切下差异点，经胰酶胶内消化，进行基质辅助激光解吸电离—飞行时间质谱分析，最终鉴定出共41个差异表达的蛋白。 在这些已鉴定蛋白质中，诱导分化后表达降低的有31个，其中包括Aldolase A、High mobility group protein 1和Cyclophilin A等；诱导分化后表达增加的9个，有Retinoid binding protein 7、c-Ret等。对这些差异表达蛋白的分析结果表明，分化过程涉及能量代谢、膜运输、mRNA合成、蛋白质合成、信号传递、癌基因等。分化过程伴随基因表达谱的改变，胚胎早期表达的基因关闭，而神经元特异性基因开始表达，且表达降低的基因总数多于表达升高的基因。对鉴定的部分差异蛋白(Aldolase A，High mobility group protein 1，Cyclophilin A，c-Ret)进行半定量RT-PCR分析，mRNA表达水平和蛋白质表达水平基本一致。Western印迹分析表明，诱导后细胞神经元特异性表达的神经纤丝(NF-M)表达水平增加，而c-Ret在诱导后表达增加的结果与质谱鉴定结果和RT-PCR结果一致。 Cyclophilin A是免疫抑制剂环孢霉素A的结合蛋白，在T细胞活化中起重要作用。Cyclophilin A还有脯氨酰异构酶活性，具有与分子伴侣相似的功能。其表达谱广