论文部分内容阅读
目的卒中后中枢痛(Central post-stroke pain,CPSP)是中枢性神经病理性疼痛综合征,主要表现为与脑损伤区域相对应的躯体部位的疼痛与感觉异常,是神经病理性疼痛的一种。目前由于缺乏可靠的动物模型,卒中后中枢痛机制仍然知之甚少。本研究试图建立一个新的、可行的卒中后中枢痛大鼠模型,并对模型的可靠性进行验证。在此模型基础上进一步探究卒中后中枢痛的可能机制。文献报道嘌呤受体P2与神经病理性疼痛密切相关,特别是P2X受体,其中P2X4、P2X7与疼痛更为密切。多项研究报道周围性神经病理性疼痛模型中,P2X4受体参与了疼痛的发生与维持,但P2X4受体是否参与CPSP尚不清楚,该受体在中枢神经系统中主要表达于小胶质细胞中。本研究假设,卒中后中枢痛患者P2X4受体表达上调,促进了疼痛的发生和维持。基于此,我们通过在一侧丘脑内立体定位注射自体血,诱导CPSP模型,用神经病理性疼痛治疗药物进行验证,在此基础上检测P2X4受体的表达,并给予P2X4受体拮抗剂,观察大鼠行为变化,初步探讨P2X4受体是否参与CPSP。方法1.通过脑立体定位的方法在(280±20)g雄性SD大鼠右侧丘脑腹后外侧核内注射大鼠自体血,诱导丘脑出血性卒中后中枢痛(Central post-stroke pain,CPSP)模型。2.运用Von frey filament(VFF)、热辐射法评测大鼠在手术前后疼痛行为反应。3.通过腹腔注射临床常用缓解CPSP疼痛症状的药物进行干预,评价大鼠疼痛行为学反应,评估右侧丘脑注射自体血诱导CPSP大鼠模型的可靠性。4.运用Western Blotting检测大鼠造模前后P2X4受体在右侧丘脑中的表达水平。5.运用Q-PCR方法,检测大鼠造模前后右侧丘脑中P2X4受体mRNA的扩增情况。6.运用免疫荧光染色方法,研究右侧丘脑注射自体血诱导CPSP模型大脑内P2X4受体的分布及表达情况。7.在造模基础上,予右侧丘脑核团内注射P2X4受体拮抗剂5-BDBD,再次测试大鼠疼痛行为的变化。结果1.SD大鼠右侧丘脑注射自体血,在7天内能诱导双侧后足的机械痛阈值下降。2.腹腔注射加巴喷丁、阿米替林、度洛西丁等药物,能一定程度升高机械痛阈值,缓解疼痛症状。3.大鼠丘脑出血卒中后中枢痛模型中P2X4受体在转录以及翻译水平上存在表达上调4.丘脑注射自体血制备的卒中后中枢痛模型中,P2X4受体主要表达于丘脑受损区域的小胶质细胞上。5.丘脑区域注射P2X4受体拮抗剂5-BDBD,能够翻转卒中后中枢痛模型机械痛觉过敏的行为学变化。结论本研究提示大鼠丘脑内注射自体血诱导丘脑出血,可造成大鼠疼痛行为学上的变化,能较好模拟卒中后中枢痛模型。在该模型中,丘脑区域小胶质细胞P2X4受体的上调可能参与介导CPSP的痛觉过敏。本研究结果将有助于发现卒中后中枢痛治疗的新靶标。