季铵盐壳聚糖抗肿瘤止血贴片的初步研究

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目的:1、研究季铵盐壳聚糖对人非小细胞肺癌A549增殖、侵袭和转移的影响,并初步探讨其作用机制;2、制备季铵盐壳聚糖抗肿瘤止血贴片,并初步研究其相关性质。研究对象:1、人非小细胞肺癌A549;2、季铵盐壳聚糖抗肿瘤止血贴片。方法:1、将季铵盐壳聚糖溶于1640培养基中,设置实验低、中、高浓度组,季铵盐壳聚糖的低、中、高浓度分别是50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml,并以1640培养液作为对照组。正常培养24h后,采用台盼蓝拒染法检测A549细胞的活性;噻唑蓝(MTT)法检测季铵盐壳聚糖对A549细胞生长的抑制率;免疫印迹法(Western Blot)检测季铵盐壳聚糖作用A549细胞后其基质金属蛋白酶MMP9的表达情况;2、将季铵盐壳聚糖溶于三蒸水中,设置不同浓度组,其浓度分别是1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml,将不同浓度的季铵盐壳聚糖溶液加入到6孔板(每孔5ml)后放到-20。℃冰箱冻结成块,再移入冷冻干燥机中干燥成型。观察贴片外形,光学显微镜下分析其显微结构,测定密度、吸水率及评估其血液相容性。结果:1、台盼蓝拒染实验,显微镜下细胞计数板计数,A549细胞的活性率大于95%,活性满足于实验要求。MTT实验中,50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml季铵盐壳聚糖实验组与对照组比较有显著性差异(P<0.05),其增殖抑制率随药物浓度的增加而增强。2、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的季铵盐壳聚糖实验组作用细胞后,随着浓度升高,使MMP9蛋白表达量随之下降,呈剂量依赖方式,与对照组比较及组间比较均有显著性差异(P<0.05)。3、季铵盐壳聚糖抗肿瘤止血贴片制备的合适浓度为4mg/ml,制作成的贴片呈白色,成孔率高,吸水性能佳,有很好的血液相容性。结论:1、50μg/ml~200μg/ml的季铵盐壳聚糖对人非小细胞肺癌A549细胞的增殖有不同程度的抑制,同时能够通过抑制MMP9的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移,研究结果初步表明季铵盐壳聚糖能够通过抑制A549细胞增殖及抑制基质金属蛋白酶的表达,从而达到抑制肿瘤侵袭和转移的作用。2、季铵盐壳聚糖抗肿瘤止血贴片制备的较合适的季铵盐壳聚糖浓度为4mg/ml,制作成的贴片成孔率高,吸水性能佳,血液相容性好,是一种值得研究和开发的手术中使用的抗肿瘤止血敷料。
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