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本研究从临床和动物研究两个方面,通过研究围绝经期综合征(Perimenopausal Syndrome, PPS)的中医病理特征以及肝郁病理与雌激素(E2)、雌激素受体(Estrogen Receptor, ER)、单胺类神经递质表达关系；肝郁病理与Ca2+/cAMP信号通路功能基因表达关系,探讨PPS肝郁病理的生物学基础和分子学机制。目的(1)通过研究PPS症状、证素病理及兼杂特征,柴胡疏肝散治疗前后的PSS肝郁证患者肝郁积分、Kupperman法症状评分变化,肝郁病理分级与雌激素、神经递质关系,探讨PPS肝郁病理的部分生物学基础。(2)通过柴胡疏肝散干预PPS肝郁证大鼠,从E2、ER、神经递质变化及大鼠海马雌激素受体介导的Ca2+/cAMP信号通路探讨其分子机制。方法(1)临床研究方面收集PPS患者161例,以证素辨证的方法,分析PPS的症状分布频次、病位病性证素及其兼杂的特点。选取PPS患者中肝郁积分≥70分的患者100例,根据肝郁病理积分分为3级,予以4周的柴胡疏肝散干预,观察干预前后的肝郁病理积分、Kupperman法症状评分变化,肝郁病理分级与E2、神经递质5-羟色胺(5-HT),去甲肾上腺素(NE),多巴胺(DA)关系,探讨PPS肝郁证的生物学基础。(2)动物研究方面以3月龄成年大鼠为正常对照组(A组),13月龄自然衰老和慢性束缚法建立PPS肝郁证大鼠模型,分为围绝经期对照组(B组)、围绝经期对照组加中药组(C组)、PPS肝郁证加中药组(D组)和PPS肝郁证组(E组)等五组,药物干预3周后,予行为学观察,以实时定量PCR法检测海马区雌激素受体ERa, ERβ, GPR30(G protein-coupled receptor30) mRNA表达,用Fura-2/AM双波长荧光法测定海马细胞内游离钙浓度,用RT2Profiler PCR Arrays芯片检测海马Ca2+/cAMP通路上相关基因差异性表达,用ELISA法检测海马及血清雌激素及递质5-HT, NE,DA,血清钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ)表达。结果(1)临床研究部分1.PPS的症状分布频次前10位是阵发性烘热,汗出,急躁易怒,情绪抑郁或焦虑,月经紊乱,胸闷、失眠,喜太息,心悸,咽部异物感,各占91.93%,91.93%,85.09%,81.99%,78.26%,69.56%,67.70%,55.28%,52.17%,39.75%。2.PPS的病位证素涉及肝、肾、脾、心,主要是肝和肾,分别占91.93%和52.17%,与其它病位相比有显著性差异,P<0.01,肝的病位积分最高。3.PPS的病性证素主要涉及气滞、阴虚、气虚、阳虚、血虚,其中气滞所占的比例最高为90.1%,与其它病性所占比例相比有显著性差异,p<0.01,气滞的病性积分最高。4.PPS证素病位兼杂中,以肝肾最多见,其次为脾肾、肝脾,病性兼杂以气滞兼阴虚最为多见。5.临床干预前PPS患者肝郁病理0级0人,1级50人,2级34人,3级16人,干预后0级70人,1级22人,2级3人,3级5人,干预前后肝郁病理分级人数有显著性改变P<0.01。6.干预前后,Kupperman法症状评分有显著性改变,P<0.01。7.干预前后,肝郁病理分级与E2变化有显著相关关系,R=-0.497,P==0.001。8.干预前后,5-HT, NE, DA变化有显著性差异P<0.01。肝郁病理分级与神经递质变化有显著相关关系：与5-HT R=-0.417,P=001;与NER=-0.352P=0.001;与DAR=-0.609P=0.000。(2)动物研究部分1.E组与D组比,旷场实验水平得分和垂直得分有显著性差异,P<0.01。糖水嗜好实验,E组与D组比较,糖水饮用显著下降,P<0.01。E组与D组比较体重明显下降,P<0.01。2.海马区E组ERamRNA较B组减少,ERβ较B组升高但无显著性差异,GPR30mRNA组间没有显著性差异；E组ERamRNA/ERβmRNA比值较B组低,柴胡疏肝散干预后D组明显升高,P<0.01；E组E2较A组低,干预后D组升高,但无显著性差异；E组5-HT, DA较B组明显下降,NE, DA经干预后升高但无显著性差异,5-HT明显增高,P<0.01。血清中,E组5-HT较B组明显高,经干预后明显下降P<0.01；E组E2, DA, NE较B组低,经干预DA后上升明显,P<0.01,E2,NE有上升趋势,但无显著性差异P>0.05。3.E组海马Ca2+浓度显著升高,干预后Ca2+浓度下降P<0.01。E组CaMKII浓度较D组显著升高,干预后下降,P<0.01。4.PCR芯片显示,E组与B组比,在海马细胞cAMP通路上有6个功能基因(IL-2,NOS2, Th, Calm1, S100g和SSt)有差异性表达P<0.05或P<0.01,柴胡疏肝散干预后,E组与D组比较,SSt有差异性表达P<0.05。结论1.PPS的病位证素以肝为主,涉及肾、脾、心,病性证素以气滞为主,涉及阴虚、血虚、气虚,证素分布呈现多脏分布、虚实夹杂特点,肝郁是其主要病理特点,症状以阵发性烘热,汗出,急躁易怒,情绪抑郁或焦虑,月经紊乱,胸闷、失眠,喜太息,心悸,咽部异物感等为主。2.PPS患者干预前后Kupperman法症状评分及肝郁病理积分显著改善,肝郁病理分级与血清E2有显著性负性相关关系,与5-HT, NE, DA有显著性差异,呈负相关,说明肝郁是PPS主要病理,E2和神经递质改变是肝郁证的生物学基础。3.大鼠行为学实验和糖水嗜好实验、体重变化及血清雌激素变化等证明自然衰老和慢性束缚PPS肝郁证大鼠造模成功。4.PPS大鼠肝郁证与海马及周围血的E2神经递质的表达与有密切关系,与海马细胞的雌激素、雌激素受体ERamRNA/ERβmRNA比值表达有密切关系。5.PPS大鼠肝郁证与海马区Ca2+/CaMKII通路有密切关系,与海马Ca2+/cAMP通路调节神经传导的基因表达变化有关系,Ca2+/cAMP信号通路部分功能基因表达改变可能是PPS肝郁证的分子学机制。