CDK4分子是一种细胞周期依赖性激酶,是细胞周期G1-S期的调控中心。CDK4蛋白在Gl中后期呈表达高峰并与细胞周期蛋白D1(CyclinDl)结合成复合体而被激活,介导Rb基因产物磷酸化,从而促进细胞G1-S期的转化和细胞增殖。国内外研究证明该基因的扩增和过度表达广泛存在于人类的多种肿瘤组织及其细胞中, CDK4基因的异常与多种肿瘤的发生密切相关。为了以CDK4为突破点寻找肿瘤的诊断、鉴别诊断及抗肿瘤治疗的新途径,该分子的研究已成为一个新的研究热点。本研究从肝癌组织中获得总RNA,逆转录PCR反应获得人CDK4基因,将目的基因插入原核表达载体pET28a(+)的启动子下游,构建了原核表达质粒pET28a(+)-CDK4。将重组质粒pET28a(+)-CDK4用氯化钙法转化入宿主菌BL21(DE3)中,筛选出含重组质粒的基因工程菌。工程菌经IPTG诱导表达和SDS-PAGE电泳分析及Western blotting鉴定表明含有人pET28a(+)-CDK4重组质粒的工程菌BL21(DE3)可以表达出34kd左右的CDK4蛋白质。本研究的成果可以进一步研究CDK4的生物活性,筛选CDK4的配体和阻断剂以及制备单克隆抗体。